Lymphoprep™は、Bøyum1） らの方法を応用して、世界で最初に販売された単核球（単球、リンパ球）分離用の遠心分離媒体です。Ready-to-use チューブタイプのLymphoprep™ チューブもご用意しています。
これまで、製造元Serumwerk Bernburg 社、販売元Abbott Diagnostics Technologies社として販売されていましたが、 この度、Serumwerk Bernburg社が販売も行うこととなりました。今後も継続し て、コスモ・バイオが製品をお届けいたします。
ヒト全血からのPBMC（リンパ球、単球）の分離
図1. ヒト血液細胞の密度と細胞数
Lymphoprepは密度1.077g/mLを境に細胞画分を分離します。
図：Lymphoprep™を用いて分離後のチューブ写真
6人の異なるドナーのサンプルをたが、どのサンプルも再現性良く分離できた。
| Sodium diatrizoate | 9.1% (w/v) |
| Polysucrose 400 | 5.7% (w/v) |
| 密度 | 1.077 ± 0.001 g/ml |
| 浸透圧 | 290 ± 15 mOsm |
| エンドトキシン | < 1.0 IU/ml |
図2. Diatrizoic acid
Diatrizoic acidは Lymphoprep™, Polymorphprep™に使用されています。
(1) 全血を抗凝固剤(EDTA、heparin、ACD)入りのチューブに回収、もしくは脱繊維血を使用して下さい。
(2) 全血サンプルを等量の0.9％NaCl 水で1：1に希釈します。
(3) 12-15mLの遠心チューブの中で、3ml の Lymphoprep™ 上層に 6ml の希釈血液を注意深く重層します。あるいは、Lymphoprep™ を希釈血液の下に重層する事も可能です。希釈血液と分離媒体が混ざらないよう注意して操作して下さい。エアロゾル形成を防ぐためキャップを閉めて下さい。
(4) 800 x g、20分、室温（20°C 程度）でスイングローターを用いて遠心します。2時間以上保存された血液を使用する場合、遠心時間を30分に増やして下さい。
(5) 遠心後は右上図の様にサンプルと Lymphoprep™ の境界面に明瞭な単核球のバンドが形成されます。バンドをパスツールピペットで回収します。
(6) 回収した画分を 0.9％ NaClもしくは培地を用いて希釈し、画分の密度を下げ、250 x g、10分 遠心して細胞をペレットにします。
| 品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
|---|---|---|---|---|
LymphoprepTM |
SEW | 1856 | 250 ML |
￥13,000 |
| LymphoprepTM |
SEW | 1856 | 4*250 ML |
￥38,000 |
| LymphoprepTM |
SEW | 1858 | 6*500 ML |
￥92,000 |
Lymphoprep™が 50 mL チューブまたは15 mL チューブに入っているReady-to-use タイプです。
チューブ内に多孔の仕切り板があるため、サンプルを直接チューブに注ぐことができ操作が簡便です。
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■ Lymphoprep™ チューブのサンプル * 無料サンプルは1研究室あたり1点のみです。 |
| Sodium diatrizoate | 9.1% (w/v) |
| Polysucrose 400 | 5.7% (w/v) |
| 密度 | 1.077 ± 0.001 g/ml |
| 浸透圧 | 290 ± 15 mOsm |
| エンドトキシン | < 1.0 IU/ml |
1) Bøyum, A. (1968) : Separation of leucocytes from blood and bone marrow. Scand. J. Clin. Lab. Invest. 21 suppl. 97.
(1) 全血を抗凝固剤(EDTA、heparin、ACD)入りのチューブに回収、もしくは脱繊維血を使用して下さい。
(2) Lymphoprep™ は使用前に1 分間、400xg で遠心し、Lymphoprep™ をチューブの底に移動させてください。
(3) 6 ml の希釈血液 (1:1) を2 ml の Lymphoprep™ が入ったチューブ、または 20-30 ml の希釈血液 (1:1) を 10 ml の Lymphoprep™ が入ったチューブに直接注ぎます。
(4) 800g、20分、室温でスイングローターを用いて遠心します。
(5) 遠心後は図の様にサンプルと Lymphoprep™ の境界面に明瞭な単核球のバンドが形成されます。バンドをパスツールピペットで回収します。もしくはチューブを静かに傾けることでプラスチックインサート上部のにある溶液だけ上を取り出すこともできます。
(6) 回収した画分を0.9%NaCl水を用いて希釈して画分の密度を下げ、250 x g、10分 遠心して細胞をペレットにします。
| 品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
|---|---|---|---|---|
| LymphoprepTM Tube (tube size: 15mL) |
SEW | 18002 | 30*2 ML |
￥19,000 |
| LymphoprepTM Tube (tube size: 50mL) |
SEW | 18001 | 18*10 ML |
￥19,000 |
商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。
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