記事ID ： 3658

シングルチューブでFast qPCRとHRMの両方に使えるマスターミックス Fast EvaGreen® Master Mixes

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メーカー名：Biotium, Inc.

Fast EvaGreen® Master Mixは、定量リアルタイムPCR（qPCR）と高解像度融解曲線分析（high-resolution melt curve analysis：HRM）の両方でお使いいただけます。
EvaGreen®の吸収及び発光スペクトルはSYBR® GreenやFAMと類似していますので同じ設定でお使いいただけます。

特長

PCR 阻害が非常に小さい：SYBR® Green I とは異なり、PCR阻害が非常に小さい。
蛍光シグナルが高い：EvaGreen® は濃度が比較的高いため、SYBR® Green I よりも非常に強い PCRシグナルを得ることができます。また色素再分布 (dye redistribution) のような問題も排除できるのでマルチプレックスPCR や高解像度融解曲線分析 (high-resolution melt curve analysis：HRM) に適しています。この技術は遺伝子型解析やヘテロ二本鎖検出によく用いられています。EvaGreen® を使ったqPCR は Fast PCRプロトコールもご利用いただけます。
非常に安定：室温状態でPCR操作をしても分解されることはありません。バッファー中の色素は室温もしくは冷蔵庫で安定して保存ができます。また凍結融解を繰り返しても安定しています。一方で SYBR® Green I は不安定であることが知られており、分解された色素はPCR 阻害をさらに引き起こしてしまいます。
安全：EvaGreen® は細胞膜不浸透性なので SYBR® Green I よりも安全な色素です (図3)。

EvaGreen® 色素のデータ

図1　PBSバッファー中の二本鎖DNA における EvaGreen® の発光、励起スペクトラム

図2　EvaGreen® とSYBR® Green I の安定性比較

HeLa細胞を SYBR Green I (1.2μM、左) もしくは EvaGreen® (1.2μM、右) のいずれかで 37℃でインキュベートしたのち蛍光顕微鏡で観察
図 3　HeLa細胞を SYBR® Green I (1.2μM、左) もしくは EvaGreen® (1.2μM、右) のいずれかで 37℃でインキュベートしたのち蛍光顕微鏡で観察した。EvaGreen® で30分間インキュベートしたものでは細胞染色が見られなかった。これはEvaGreen® が細胞膜を通過しなかったことを示している。しかし、 SYBR® Green I では30分後、SYBR® Green I は細胞核を濃緑色 (左) に染色した。

構成内容

EvaGreen® dye
dNTP
Cheetah™ ホットスタートTaqポリメラーゼ
バッファー

Fast EvaGreen® Master Mixes

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Fast EvaGreen^(R) Master Mix for qPCR	BTI	31003	2*1 ML [200 rxn]	￥42,000
Fast EvaGreen^(R) Master Mix for qPCR	BTI	31003-1	5*1 ML [500 rxn]	￥93,000
Fast EvaGreen^(R) Master Mix for qPCR	BTI	31003-2	50*1 ML [5000 rxn]	お問い合わせ
Fast EvaGreen^(R) Master Mix for qPCR, trial size	BTI	31003-T	1 ML [100 rxn]	￥20,000