記事ID ： 11029

フローサイトメトリーでGpIIb/IIIa 受容体への結合度を検証血小板GpIIb/IIIaレセプター結合度測定キット

メーカー名：BioCytex SARL

GpIIb/IIIa糖タンパク質（抗凝集物質）とそのレセプターとの結合度をフローサイトメトリーで分析するキットです。
血小板のGpIIb/IIIaレセプターのトータル量とフリー（抗凝集物質に結合していないレセプター）の量を蛍光強度により測定し、スタンダードカーブと比較することで算出できます。

構成内容

希釈液（×10）
ネガティブコントロール（マウスモノクローナル抗体IgG）
MAb1試薬（抗GpIIIa (CD61)モノクローナル抗体）
MAb2試薬（抗GpIIIa (CD61)モノクローナル抗体）
校正用ビーズ懸濁液（既知量のマウスIgGでコートされたビーズ）
染色試薬（FITC標識抗マウスIgGポリクローナル抗体）

原理

血小板GpIIIに特異的な2種類のモノクローナル抗体をサンプルに加えて染色し、フローサイトメトリーで蛍光強度を測定します。蛍光強度は、血小板表面に結合したモノクローナル抗体の数に比例します。2種類のモノクローナル抗体を使用することで、2つのパラメーター（GpIIb/IIIaレセプターのトータル量及びフリーの量）を同時に定量できます。

使用例

図1　校正用ビーズの分析
左：FSとSSを対数でプロットしたサイトグラム
ビーズのメイン群（「CAL」で表した部分）にゲートをセットする。
右：左図の「CAL」部分の蛍光ヒストグラム
3つの蛍光ピーク（図中A、B、C）が3種類の校正用ビーズを示す。

血小板GpIIb/IIIaレセプター結合度測定キット - サンプル（全血）の分析
図2　サンプル（全血）の分析
左：FSとSSを対数でプロットしたサイトグラム
血小板が他の血液成分から単離される（図中「PLT」部分）
右：血小板の蛍光ヒストグラム

血小板GpIIb/IIIaレセプター結合度測定キット - 校正用ビーズのスタンダードカーブ（例）
図3　校正用ビーズのスタンダードカーブ（例）
X軸：3種類の校正用ビーズのMFI（蛍光強度平均値）
Y軸：ビーズのモノクローナル抗体分子の量（ロットごとに表示）

表1：結合度の算出方法
抗凝集物質のタイプ	GpIIIaレセプターの量			結合比（％）
抗凝集物質のタイプ	トータル	フリー	結合	結合比（％）
モノクローナル抗体	MAb2	MAb1	MAb2-MAb1	（MAb2-MAb1）/MAb2×100
ペプチド又はペプチド模倣薬	MAb1	MAb2	MAb1-MAb2	（MAb1-MAb2）/MAb1×100