Applied Biological Materials社では、リコンビナント Cas9 タンパク質(Cas9 Nuclease Protein)を販売しています。in vivo での高効率遺伝子改変にもご利用いただけます
背景
CRISPR-Cas9システム(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)は、特異的なゲノムの破壊や置換などを可能にする最新のゲノム編集技術です。本システムでは、標的特異的な単鎖ガイドRNA(sgRNA:single guide RNA)によってCas9ヌクレアーゼタンパク質がsgRNA認識配列に誘導され、ゲノムDNA二本鎖をほどき、切断します。このDNA二本鎖切断(DSBs)によってNHEJ(非相同末端結合;non-homologous end joining)のDNA修復機構が機能しますが、CRISPR-Cas9が過剰に発現していることによりエラーが生じ、フレームシフトすることで標的遺伝子のオープンリーディングフレーム破壊につながります。
仕様・構成内容
品名 | Cas9 Protein | High Concentration Cas9 Protein |
---|---|---|
濃度 | 1000 nM | 10 µM |
容量 | 50 pmol (50 μL) |
250 pmol (25 μL) |
構成内容 |
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その他 仕様 |
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製品データ
図1. Cas9のヌクレアーゼ活性の検証(品番:K008)
8kbのDNA基質を分解した結果、〜75%の効率でDNAが開裂され、〜3kbと〜5kbのバンドが形成された。
図2. Cas9のヌクレアーゼ活性の検証(品番:K030)
8kbのDNA基質を分解した結果、〜95%の効率でDNAが開裂され、〜3kbと〜5kbのバンドが形成された。
- 1 = freeze-thaw vector (not supercoiled)
- 2 = no sgRNA control (supercoiled)
- 3 = [100nM] of Cas9
- 4 = [50nM] of Cas9
- 5 = [25nM] of Cas9
- 6 = [10nM] of Cas9
図3. Cas9のヌクレアーゼ活性の検証(品番:K034)
ニックが入り、Cas9濃度依存的にオープンサーキュラープラスミドが形成された。オープンサーキュラープラスミドは、スーパーコイルDNAと比較してよりゆっくりとゲル中を移動する。
結果
- どちらのCas9もsgDNA存在下でのみ、DNAを開裂した
- 品番:K008は開裂効率〜75%、品番:K030は〜95%を示した
- 品番:K030は他社品よりも優れた開裂効率を示した
- 品番:K034は濃度100nM、37℃、1時間インキュベートすると、100%のプラスミドにニックが入った
Cas9 Protein
品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
---|---|---|---|---|
Cas9 Nuclease Protein | APB | K008 | 50 PMOL [50 μl, 1000 nM] |
お問い合わせ |
Cas9 Nuclease NLS Protein | APB | K030 | 50 PMOL [50 μl, 1000 nM] |
¥8,000 |
Cas9 Nuclease GFP NLS Protein | APB | K048 | 50 PMOL [50 μl] |
¥11,000 |
Cas9 Nickase D10A Protein | APB | K032 | 50 PMOL [50 μl, 1000 nM] |
お問い合わせ |
Cas9 D10A Nickase GFP NLS Protein | APB | K049 | 50 PMOL [50 μl] |
お問い合わせ |
Cas9 Nickase D10A NLS Protein | APB | K034 | 50 PMOL [50 μl, 1000 nM] |
お問い合わせ |
Cas9 Nickase H840A Protein | APB | K036 | 50 PMOL [50 μl, 1000 nM] |
お問い合わせ |
Cas9 Nickase H840A NLS Protein | APB | K038 | 50 PMOL [50 μl, 1000 nM] |
お問い合わせ |
Cas9 Null Mutant Protein | APB | K040 | 50 PMOL [50 μl, 1000 nM] |
お問い合わせ |
Cas9 Null Mutant NLS Protein | APB | K042 | 50 PMOL [50 μl, 1000 nM] |
お問い合わせ |
High Concentration Cas9 Protein
品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
---|---|---|---|---|
Cas9 Nuclease Protein | APB | K108 | 250 PMOL [25 μl, 10 μM] |
¥17,000 |
Cas9 Nuclease NLS Protein | APB | K130 | 250 PMOL [25 μl, 10 μM] |
¥17,000 |
Cas9 Nuclease GFP NLS Protein | APB | K148 | 250 PMOL [25 μl] |
¥32,000 |
Cas9 Nickase D10A Protein | APB | K132 | 250 PMOL [25 μl, 10 μM] |
お問い合わせ |
Cas9 Nickase D10A NLS Protein | APB | K134 | 250 PMOL [25 μl, 10 μM] |
¥28,000 |
Cas9 D10A Nickase GFP NLS Protein | APB | K149 | 250 PMOL [25 μl] |
¥32,000 |
Cas9 Nickase H840A Protein | APB | K136 | 250 PMOL [25 μl, 10 μM] |
お問い合わせ |
Cas9 Nickase H840A NLS Protein | APB | K138 | 250 PMOL [25 μl, 10 μM] |
¥28,000 |
Cas9 Null Mutant Protein | APB | K140 | 250 PMOL [25 μl, 10 μM] |
¥28,000 |
Cas9 Null Mutant NLS Protein | APB | K142 | 250 PMOL [25 μl, 10 μM] |
¥28,000 |
商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。
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