新しいアデノ随伴ウイルスベクター作製システム！ AAV ヘルパーフリー発現システム

AAV ヘルパーフリー発現システムは、リコンビナントヒトアデノ随伴ウイルス（rAAV）粒子をヘルパーウイルスなしで作製するシステムです。豊富なAAVセロタイプをラインアップしています。

AAV のヘルパーフリー発現

図1　ヘルパーフリーシステム

本システムでは、感染性AAV粒子の生産に必要なアデノウイルス遺伝子はプラスミドpHelper（E2A, E4, VA RNA遺伝子など）上にあり、ヒトAAVベクターDNAと共トランスフェクションされます。E1遺伝子は、293宿主細胞で恒常的に発現しています。

生きたヘルパーウイルスを使用しない本システムは、安全かつ便利なデリバリーシステムです。本システムで用いるAAV-2 ITRを含むウイルスベクターからrep 遺伝子およびcap遺伝子をとりのぞき、これらの遺伝子をpAAV-RCプラスミド上に組み込みました。ウイルスベクターからrep 遺伝子およびcap遺伝子を取り除くことで、目的遺伝子をウイルスゲノムに挿入することができます。

• pHelperプラスミドはE2A、E4、VA RNAアデノウイルス遺伝子をコードしています。ヘルパーアデノウイルスが必要な遺伝子は取り除いています。
• AAV-DJシステムは、幅広い組織において高効率で感染するように、8種類の異なるAAVのセロタイプからハイブリッドカプシドを作製しています（図2）。
• AAV-DJ/8は心臓および脳組織によく取り込まれるようにデザインされたAAV-DJの変異体で、AAV-8とAAV-9によく似ています（表1）。
• 本発現システムはパッケージングプラスミド、発現ベクター、GFPコントロールベクターを含みます。

1. pAAV-IRES（MCS） 発現ベクター
2. pAAV-RC ベクター
3. pHelper ベクター
4. pAAV-GFP コントロールベクター

※本商品には293細胞は含まれていません。高タイターのリコンビナントAAVを得るには、セルバイオラボ社の293AAV Cell Line (品番 AAV-100) をお勧めします。

AAV ヘルパーフリー発現システムは、ネイティブのセロタイプ1〜6に加えて、全く新しいAAV-DJおよびAAV-DJ/8が作製できる商品もラインアップしています。

• AAV-DJシステム
DNAシャッフルテクノロジー（図2）によって8種類のネイティブのセロタイプ（AAV-2、 AAV-4、AAV-5、AAV-8、AAV-9、AvianAAV、Bovine AAV、Caprine AAV）を組み合わせたハイブリッドカプシドを調製します。高感染性のリコンビナントAAVが得られ、AAV-2より高効率で様々な細胞・組織に形質導入できます。

• AAV-DJ/8
AAV-DJのヘパリン結合ドメインにおけるポイントミューテーションにより作製しました。AAV-DJ/8システムを用いて作製したリコンビナントAAVは心臓および脳組織に感染する能力において、AAV-8 および AAV-9と類似しています。

図2　カプシドDNAファミリーシャッフルによるAAV-DJの作製

AAVインフェクション効率

図3　AAV2-GFPの作製と遺伝子導入
AAV2-GFP はpAAV-GFP、pAAV-RC2、pHelperプラスミドで293AVV細胞の共トランスフェクションによって作製した。ウイルス上清を採取し、293AD細胞を48時間AAV-GFPで感染させた。
1：トランスフェクション前の293AAV細胞
2：トランスフェクション後48時間経過後の293AAV細胞
3：トランスフェクション後48時間経過後の293AAV細胞におけるGFP発現
4：感染後48時間経過後の293AD細胞におけるGFP発現

AAVヘルパーフリー発現システムはいろいろなフォーマット・セロタイプをご用意しています。

• AAVヘルパーフリー発現システム（コンプリート）
  パッケージングプラスミド、発現システム、GFPコントロールベクターすべてが含まれます。
• AAVヘルパーフリーパッケージングシステム
  pHelperプラスミド、セロタイプ別Rep-Capプラスミドが含まれます。すでにAAV発現コンストラクトをお持ちのお客様にご利用いただけます。
• 何れかのセロタイプのAAVヘルパーフリーパッケージングシステムをお持ちで他のセロタイプを試されたいお客様には、ネイティブなセロタイプ1-6のほかに新規セロタイプAAV-DJおよびAAV-DJ/8のAAV Rep-Capプラスミドをご用意しています。
• AAVヘルパーフリーパッケージングシステムをお持ちでクローニングベクターをご利用のお客様には、個別に10種類のAAVヘルパーフリー発現ベクターをご用意しています。
• コントロールウイルス調製用のAAVコントロールベクターの他、プリメイドAAVコントロールウイルス、AAVパッケージング細胞もございます。

品番の末尾がDJおよびDJ-8のものは、アカデミック・非営利団体のお客様のみご購入いただけます。企業のお客様でご購入希望の方におかれましては、恐れ入りますがライセンス契約の必要がございます。詳細はお問い合わせください。

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