記事ID ： 6842

DCFH-DiOxyQプローブで活性を蛍光測定 OxiSelect™ In Vitro ROS／RNS アッセイ

メーカー名：Cell Biolabs Inc.

生細胞をサンプルとした活性酸素種（ROS）活性測定試薬がほとんどの中、本商品は調製した多様な生体液試料（血清、血漿、尿、細胞ライセート、培養細胞上清）のトータル活性酸素種（ROS）／活性窒素種（RNS）フリーラジカルを測定できます。

蛍光プローブに独自の DCFH-DiOxyQ（DiOxyQ）プローブを採用しており、蛍光プレートリーダーで蛍光検出（480 nm / 530 nm）します。本キットは、フリーラジカルに対する抗酸化物質の評価にも有用です。

特長

H₂O₂、NO、ROO、ONOO^-を含む全てのROSおよびRNSを測定可能です。
血清、血漿、尿、細胞ライセート、培養細胞上清に適しています。
限界検出感度は、DCFは10pM、H₂O₂は40nMです。

構成内容

プライミング試薬
安定剤
触媒
DCF-DiOxyQ
DCF スタンダード
過酸化水素水

アッセイ原理

蛍光プローブに独自の消光プローブ DCFH-DiOxyQ（DiOxyQ）を採用しています。原理としては、まずDCFH-DiOxyQを消光除去試薬で処理し、その後安定化させて高い反応性のDCFH 型にします。この反応段階で、DCFHはROSやRNSと反応し、DCFHは急速に酸化されてDCFとなり蛍光を発します（図1）。蛍光強度は、サンプル中のトータルROS/RNS量に比例します。DCFH-DiOxyQプローブは過酸化水素（H₂O₂）、ペルオキシルラジカル（ROO）、一酸化窒素（NO）、ペルオキシ亜硝酸（ONOO⁻）と反応可能です。これらのフリーラジカル分子はROSおよびRNSを代表しています。検出感度はDCFに対して10pM、H₂O₂に対して40nMです。

図1．アッセイ原理

未知のROSあるいはRNSサンプル、およびスタンダードを、酸化反応を加速する触媒と共にウェルに添加します。
短時間インキュベーション後、全てのウェルに用意したDCFH プローブを添加し、酸化反応を開始します。
通常の蛍光プレートリーダーで測定します。未知サンプル内のフリーラジカル含有量は、あらかじめ定められたDCFあるいは過酸化水素標準曲線と比較して決定します。

使用例

図2．DCFの検量線

図3．本キットによるフリーラジカル種の検出
左：ペルオキシラジカル、水：ペルオキシ亜硝酸

よくある質問 Q&A

【01】 Intracellular ROS アッセイ（品番：STA-342）と In Vitro ROS アッセイ（品番：STA-347）の違いは?

主な違いは適用サンプルです。

Intracellular ROS アッセイ（品番：STA-342）は、培養細胞をアッセイします。細胞透過性のDCFH-DAは、細胞に添加され、細胞内エステラーゼによって加水分解され、DCFHとなります。一旦、ROSによって酸化されると、DCFHは、蛍光のDCFとなります。DA基を除去するのにエステラーゼ活性を必要とするため、Intracellular ROS アッセイは生細胞または組織に対してのみ有効です。

一方、In Vitro ROSアッセイ（品番：STA-347）は、細胞/組織ライセート、血液、尿に使用されます。In Vitro ROSアッセイキット（品番：STA-347）は、活性型のエステラーゼと染色液が細胞膜を透過する必要がありません。

下記よりそのほかのFAQもご覧いただけます。

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In Vitro ROS/RNS Assay

OxiSelect™ In Vitro ROS／RNS アッセイ

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
OxiSelect^TM In Vitro ROS/RNS Assay Kit (Green Fluorescence)	CBL	STA-347	96 ASSAY	￥147,000
OxiSelect^TM In Vitro ROS/RNS Assay Kit (Green Fluorescence), Trial Size	CBL	STA-347-T	20 ASSAY	￥74,000
OxiSelect^TM In Vitro ROS/RNS Assay Kit (Green Fluorescence)	CBL	STA-347-5	5*96 ASSAY	お問い合わせ