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記事ID : 14683
研究用

内在性のプロモーターを強力に動員→標的遺伝子を活性化、レンチウイルス粒子もありますCRISPR-dCas Activation システム

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CRISPR-Cas9 システムを応用することで、遺伝子ノックアウトだけでなく内在性遺伝子発現の強い活性化が可能になります。

CRISPR-Cas9 システムにおいて、いくつかの改良型構成物を利用することで3 種のプラスミドからなるSAM複合体(Synergistic Activation Mediator complex)が産生します。これらプラスミドはそれぞれ、転写活性化因子 VP64と融合した不活性型Cas9(dCas9)ヌクレアーゼ、さまざまな転写因子の動員を促進するMS2-p65-HSF1融合タンパク質、およびMS2-P65-HSF1 融合タンパク質に選択的に結合するアプタマー修飾型sgRNA 足場をコードします。

このSAM 複合体は、現時点で最も効果的な転写活性化システムです。

特長

  • 3種のプラスミドの質量比1:1:1 で構成
    -転写活性化因子VP64 に融合した不活性化型Cas9(dCas9)ヌクレアーゼ (D10AとN863A)とブラストサイジン耐性遺伝子をコードするプラスミド 
    -MS2-p65-HSF1 融合タンパク質とハイグロマイシン耐性遺伝子をコードするプラスミド   
    -標的特異的20 塩基ノンコーディングRNA 配列とピューロマイシン耐性遺伝子をコードするプラスミド
  • SAM複合体が内在性プロモーターを強力に動員し、標的遺伝子の内在性発現を活性化
  • ヒト、マウス遺伝子をゲノムワイドに網羅
  • 薬剤耐性遺伝子によりCRISPR/dCas9 活性化プラスミドが安定してトランスフェクションされた細胞を選択可能
  • 2種の製品フォーマット:精製済みプラスミドとレンチウイルス粒子

システムの概要

CRISPR/dCas9 活性化プラスミドは、以下の3種のプラスミド の質量比1:1:1 で構成されます。

■ 使用するプラスミド3種類

  • CRISPR-dCas9-VP64 plasmid
    転写活性化因子VP64 に融合した不活性化型Cas9(dCas9)ヌクレアーゼ(D10A とN863A)とブラストサイジン耐性遺伝子をコードするプラスミド

    CRISPR-dCas9-VP64 palsmid

  • MS2-P65-HSF1 plasmid
    MS2-p65-HSF1 融合タンパク質とハイグロマイシン耐性遺伝子をコードするプラスミド

    MS2-P65-HSF1 plasmid

  • sgRNA (MS2) plasmid U6
    標的特異的20 塩基ノンコーディングRNA 配列とピューロマイシン耐性遺伝子をコードするプラスミド

    sgRNA (MS2) plasmid U6

■ SAM 転写活性化システム

SAM転写活性化システム
SAM複合体が標的遺伝子の上流に位置する特異的部位に結合して内在性プロモーターを動員し、標的遺伝子の転写を強力に活性化。

 

CRISPR-dCas9 SAMシステムの参考文献:

Konermann, S., et al. 2014. Genome-scale transcriptional activation by an engineered CRISPR-Cas9 complex. Nature. E-published.[PMID:25494202

使用例

HEK293T細胞におけるヒトEGFR遺伝子の活性化
ヒト用EGFR CRISPR活性化プラスミドをトランスフェクションしたHEK293T細胞におけるヒトEGFR遺伝子の活性化
HEK293T細胞におけるヒト TLR2遺伝子の活性化
ヒト用TLR2 CRISPR活性化プラスミドをトランスフェクション したHEK293T細胞におけるヒト TLR2遺伝子の活性化
 

 

CRISPR - dCas9レンチウイルスActivationシステム

  • 3種類のCRISPR/dCas9 活性化プラスミドをパッケージングし、高タイターのCRISPR/dCas9 活性化レンチウイルス粒子を調製して、プール型にてご提供
  • 哺乳動物細胞(ヒトまたはマウス)での遺伝子活性化用に、そのままトランス ダクションできるウイルス粒子を200μL(1x 10^6 IFU) ご提供
  • トランスフェクションが困難な細胞に
  • 遺伝子発現活性化確認用に適切なコントロール抗体もご用意

 

CRISPR-dCas Activation プラスミド 商品検索方法

1.

サンタクルズ社のWEBサイトへアクセスし、検索ウィンドウに遺伝子名を入力して検索してください。

サンタクルズ社のWEBサイト
2.

画面をスクロールすると、抗体製品の下にCRISPR-Cas9製品が掲載されています。
品名をクリックし、製品ページをご確認ください。

サンタクルズ社のWEBサイト

データシートおよびプロトコールはこちらよりご覧いただけます。

サンタクルズ社のWEBサイト
3.

品番、品名、数量を指定し、ご利用の代理店様へご注文ください。

希望販売価格:
CRISPR - dCas9 Activation Plasmid:72,000円
CRISPR - dCas9 レンチウイルス粒子:82,000円
でございます。

参考文献

1. Cong, L., et al. 2013. Multiplex genome engineering using CRISPR/Cas systems. Science 339: 819-823.
2. Mali, P., et al. 2013. RNA-guided human genome engineering via Cas9. Science 339: 823-826.
3. Maeder, M.L., et al. 2013. CRISPR RNA-guided activation of endogenous human genes. Nat. Methods 10: 977-979.
4. Hsu, P., et al. 2014. Development and applications of CRISPR-Cas9 for genome editing. Cell 157: 1262-1278.
5. Van der Oost, J., et al. 2014. Unraveling the structural and mechanistic basis of CRISPR-Cas systems. Nat. Rev. Microbiol. 7: 479-492.
6. Konermann, S., et al. 2014. Genome-scale transcriptional activation by an engineered CRISPR-Cas9 complex. Nature. E-published.

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商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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