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受託サービスから細胞株まで核内受容体研究をトータルサポート PathHunter™ 核内受容体受託サービスおよび細胞株
DiscoverX社；核内移行または、核内コファクターとの複合体形成を検出できる細胞ベースアッセイの受託サービス

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メーカー名：Eurofins DiscoverX Corporation

背景

核内受容体(Nuclear Hormone Receptor, NHR)は、甲状腺ホルモンやステロイドホルモン、ビタミンA・Dなどの脂溶性ビタミンと結合し、標的遺伝子の転写レベルを調節するタンパク質の総称です。現在までに48種類のヒトの核内受容体が同定され、それぞれが細胞の分化、脂質代謝や癌など多くの生命現象に関与していることが知られています。
DiscoverX社では、NHR核内移行の検出系およびNHRとco-Factorの複合体形成の検出系の2種類のセルベースアッセイを構築しており、それぞれのアッセイ系の 細胞株 の販売や、網羅的な核内受容体のスクリーニングにも対応した 受託サービス を提供しています。

原理

PathHunter™ NHR_TRANS Assays 原理

Fig.1　β-ガラクトシダーゼ酵素を二つに断片化し、Small fragment (ProLabel, PL)を全長の核内受容体のC末端に結合して細胞質内に局在させ、Large fragment (EA)を細胞核内に局在させます。核内受容体はリガンドが結合することにより二量体化して核内移行を起こしますが、核内受容体が核内に移行すると2つのPKおよびEA酵素断片が隣接し活性型β-ガラクトシダーゼ酵素が再構成されます。この活性型β-ガラクトシダーゼ依存的な基質分解の化学発光シグナルを測定することにより、核内受容体の核内移行に対する化合物の作用を特異的に同定することができます。

PathHunter™ NHR_Pro Assay 原理

Fig.2　NHR_PRO アッセイは、PathHunter™ NHR_TRANS Assay とは異なるSmall fragment (ProLink, PK)を全長の核内受容体のC末端に付加し、Large fragment (EA)を核内に局在するco-Activator / co-Repressor（転写制御の活性/抑制に重要）に付加して発現させます。リガンドの結合により核内受容体が核内移行すると、co-Activatorあるいはco-Repressorと複合体を形成するため、2つのPLおよびEA酵素断片が隣接し活性型β-ガラクトシダーゼ酵素が再構成されます。この活性型β-ガラクトシダーゼ依存的な基質分解の化学発光シグナルを測定することにより、核内受容体の核内移行およびco-Factorとの複合体形成における化合物の作用を特異的に同定することができます。

特長

【製品特長】

化合物のスクリーニングやプロファイリング、構造探索に最適(Fig. 3)
Full-length のNHR により、アロステリックモジュレーターやインバースアゴニストの評価も可能(Fig. 4)
簡便・洗浄不要・ワンステップ・HTS対応可能セルベースアッセイ
16-24時間の短時間培養により、細胞毒性を低減

PathHunter(R) NHRPROと NHRTRANSアッセイデータの比較

Fig.3　PathHunter® NHR_PROと NHR_TRANSアッセイデータの比較
グルココルチコイド受容体（GR）の阻害薬として知られているMifepristone （RU-486）を、PathHunter NHR 2つのアッセイで比較した結果、PathHunter® GR NHR_TRANS Assayにおいて、Mifepristoneの阻害作用は全く観察されず（A）、PathHunter® GR NHR_PRO Assayにおいては、co-Activatorのリクルートがブロックされることにより、アゴニストであるデキサメタゾンの反応は完全に阻害された。

Fig.4　Agonist profiling of Estrogen related receptor alpha (panel A), antagonist profile of glucocorticoid receptor (panel B) and Inverse agonist of Estrogen related receptor alpha (panel C) are presented here.

Fig.5　薬物代謝と輸送に関わる核内受容体の評価

【受託サービス特長】

核内受容体に対する化合物のオフターゲット試験やライブラリィスクリーニングにも適用可能
目的の核内受容体に対する化合物のプロファイリングや構造探索に最適
高感度・低バックグラウンドのHTSアッセイ

【サービス概要試験条件】

(1) 自由選択サービス

納期：被験サンプルが現地到着後約4週間
試験モード：Agonist, Antagonist, Positive Allosteric Modulator(PAM), Negative Allosteric Modulator(NAM), Inverse Agonist mode

＜試験条件＞　ご要望の試験濃度、試験mode、ターゲット数をご選択頂けます。(N=2)

nhrELECT
核内受容体ターゲットリストから自由に選択可能なプロファイリング
アゴニスト、アンタゴニスト、インバースアゴニストモードでの解析
nhrE/IC50 ELECT　(IC50/EC50)
EC50、IC50の算出（10点、3倍希釈系列の用量反応曲線）
NHR scan Library
化合物ライブラリのスクリーニング

(2) パネルサービス

＜試験条件＞

ターゲット数：18 (詳細は下記ターゲットリストを参照ください)
試験モード： Agonist, Antagonist mode
N=2
納期：下記パネルスケジュールを参照 (最新スケジュールはお問合せください)

**[2024年パネルスケジュール]**
化合物送付期限（メーカー必着）	試験結果送付予定日
2024年2月2日	2024年3月6日
2024年3月15日	2024年4月17日
2024年4月26日	2024年5月29日
2024年6月7日	2024年7月10日
2024年7月19日	2024年8月21日
2024年8月30日	2024年10月2日
2024年10月11日	2024年11月13日

※パネルスケジュールは変更になる場合がございます。

**【ターゲットリスト】**
TARGET	PRODUCT DESCRIPTION	細胞株	サービス
TARGET	PRODUCT DESCRIPTION	細胞株	パネル	カスタム
NUCLEAR TRANSLOCATION ASSAYS
AR	Androgen Receptor	○		○
GR	Glucocorticoid Receptor	○		○
LXRα	Liver X Receptor alpha	○		○
MR	Mineralocorticoid Receptor	○		○
PRβ	Progesterone Receptor beta	○		○
PROTEIN INTERACTION ASSAYS
AR	Androgen Receptor	○	○	○
ERα	Estrogen Receptor alpha	○	○	○
FXR	Farnesoid X-activated Receptor	○	○	○
GR	Glucocorticoid Receptor	○	○	○
LXRα	Liver X Receptor alpha	○	○	○
LXRβ	Liver X Receptor beta	○	○	○
LXRβ-NCoR1	Liver X Receptor beta	○	○	○
MR	Mineralocorticoid Receptor	○	○	○
PPARα	Peroxisome Proliferator Activated Receptor alpha	○	○	○
PPARδ	Peroxisome Proliferator Activated Receptor delta	○	○	○
PPARγ	Peroxisome Proliferator Activated Receptor gamma	○	○	○
PRα	Progesterone Receptor alpha	○	○	○
PRβ	Progesterone Receptor beta	○	○	○
RARα	Retinoic Acid Receptor alpha	○		○
RARβ	Retinoic Acid Receptor beta	○
RXRα	Retinoid X Receptor alpha	○	○	○
RXRγ	Retinoid X Receptor gamma	○	○	○
THRα	Thyroid Hormone Receptor alpha	○	○	○
THRβ	Thyroid Hormone Receptor beta	○	○	○
AHR	Aryl Hydrocarbon Receptor	○	○	○

＊ターゲットは、順次追加予定。

背景