Wnt 活性をルシフェラーゼで測定 Leading Light® Wnt レポーターアッセイ

Leading Light® Wnt レポーターアッセイは、ルシフェラーゼを用いたセルベースアッセイにより、Wnt 活性を測定するキットです。96ウェル／384ウェルプレートでのご使用に適しています。

「Leading Light® Wnt レポーター細胞株」「Leading Light® Wnt レポーター細胞株培地パック」「Leading Light® Wnt レポーター細胞株アッセイ試薬」、および、これらの3製品が含まれた「スターターキット」をご用意しております。

Wnt シグナリング

Wnt シグナリングに関連する研究は、分子胎生学、幹細胞生物学、腫瘍形成、再生医療、合理的な薬剤の発見などに貢献しています。Wnt リガンドは、Frizzzled（Fz）および LRP5/6 受容体に結合し、βカテニンの安定化につながるシグナル経路を惹起します。安定化したβカテニンは核内に移行し、T細胞転写因子（TCF/LEF）と複合体を形成して Wnt 標的遺伝子発現を活性化します。標準的な Wnt シグナリングは、胚発生や成人組織の維持に必要ですが、腫瘍形成や多くのヒトの変性疾患にも関わっています。

本キットは、96- または 384- ウェルマイクロプレートのようなマルチウェルプレートフォーマットに適した、ルシフェラーゼ活性測定に基づくキットです。このシステムには、専用に設計された 3T3 マウス線維芽細胞細胞株を含みます。この細胞株は、Wnt に反応するプロモーター（TCF/LEF）の制御下で、ホタルルシフェラーゼレポーターを発現します。この細胞株のレポーター遺伝子のルシフェラーゼ活性は、Wnt タンパク質または Wnt 作動薬を添加することで濃度依存的に発現増加し、Wnt 拮抗剤薬を添加することで発現減少します。このシステムは、様々な Wnt 関連リガンド（Wnt、Dkk など）の機能や活性を明らかにするのに有用です。また、Wnt の拮抗薬又は作動薬として機能する小分子や抗体の活性をスクリーニングするのにもお使いいただけます。

図１．標準的な Wnt シグナル経路とその構成因子
本商品の細胞系のレポーター遺伝子のルシフェラーゼ活性は、培地に添加した Wnt タンパク質／Wnt 作動薬 もしくは Wnt 拮抗薬の濃度に依存して、発現が増加又は減少する。

• 細胞系、培地、試薬、コントロールを含み、トランスフェクションは不要
• 高感度（Wnt3a EC50 = 45.9 nm/mL）
• 高い再現性（Z値 0.74）
• ハイスループットスクリーニング対応（384-ウェルプレート含む）
• 高いシグナルノイズ比（シグナル強調のためのリチウムクロライドは不要）

Leading Light® Wnt レポーター細胞株（品番： ENZ-61002-0001）

• Leading Light® Wnt レポーター細胞株

Leading Light® Wnt レポーター細胞株培地パック（品番： ENZ-60003-0001）

• 濃縮成長培地
• 濃縮アッセイ培地
• 凍結培地

Leading Light® Wnt レポーター細胞株アッセイ試薬（品番： ENZ-60004-0001）

• Wnt3a（マウス）タンパク質
• Dkk-1（マウス）タンパク質
• ルシフェラーゼアッセイシステム
• 2M リチウムクロライド（LiCl）
• 1M HEPES
• 96ウェル細胞培養プレート（黒・透明底）

図２．Wnt3a タンパク質に対する濃度反応
Leading Light® Wnt レポーター細胞を各濃度の Wnt3a タンパク質で6時間処理した。Wnt 処理した細胞中の化学発光量は、濃度依存的に増加した。

図３．Dkk-1 に対する濃度反応
Leading Light® Wnt レポーター細胞を、200 ng/mL の Wnt3a タンパク質存在下で、各濃度の Dkk-1 で6時間処理した。Dkk-1は、Wnt3a により増加したルシフェラーゼレベルを濃度依存的に阻害した。

図４．LiCl に対する濃度反応
Leading Light® Wnt レポーター細胞を各濃度の LiCl で6時間処理した。LiCl 処理した細胞中の化学発光量は、濃度依存的に増加した。

• Cell-Based Screening of Focused Bioactive Compound Libraries: Assessing Small Molecule Modulators of the Canonical Wnt Signaling and Autophagy-Lysosome Pathways

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