記事ID ： 7560

蛍光顕微鏡で活性酸素種／活性窒素種を測定 ROS/RNS 検出キット

メーカー名：Enzo Life Sciences,Inc.

生細胞中の活性酸素種（ROS）と活性窒素種（RNS）を同時に直接リアルタイムで検出することができる、蛍光顕微鏡検査法に用いるROS/RNS検出キットです。

使用目的

トータルROS検出用として酸化ストレス検出試薬（緑色蛍光）、スーパーオキシド検出試薬（橙色蛍光）、一酸化窒素（NO）検出試薬（赤色蛍光）の3種類の蛍光プローブの組み合わせにより、生細胞中のスーパーオキシドやROSレベルを測定できます。

また、キットにはポジティブコントロールとして、ROS とNO産生の誘導因子のPyocyaninとL-arginineをそれぞれ用意し、またネガティブコントロールとして有名なスカベンジャーであるN-acetyl-L-cysteineとc-PTIO を用意しました。

ROS/RNS検出キットはCELLestial® シリーズの1つであり、蛍光分子プローブを用いる試薬やキットは生細胞の分析に広く使用できるよう、設計されています。CELLestial® シリーズは再現性が求められる場合のイメージング用、特に共焦点顕微鏡法やフローサイトメトリー、蛍光相関分光法（FCS）に最適です。

特長

生細胞中の活性酸素種（ROS) と活性窒素種（RNS）をモニター
スーパーオキシド、一酸化窒素、ペルオキシ亜硝酸を識別<

構成内容

NO 検出試薬 (Red)
酸化ストレス検出試薬 (Green)
スーパーオキシド検出試薬 (Orange)
NO Inducer (L-Arginine)
ROS Inducer (Pyocyanin)
NO Scavenger (c-PTIO)
ROS Inhibitor (N-acetyl-Lcysteine)
洗浄バッファー

その他

検出波長：

酸化ストレス（緑）：Ex/Em: 490 nm/ 525nm
スーパーオキシド（橙）：Ex/Em: 550 nm/ 620nm
一酸化窒素（赤）：Ex/Em: 650 nm/ 670nm

アプリケーション例

HeLa 細胞を3 種類の蛍光プローブと反応させ（2 時間、37℃）、各試薬で誘導した（20 分間、37℃）

HeLa 細胞を3 種類の蛍光プローブと反応させ（2 時間、37℃）、各試薬で誘導した（20 分間、37℃）

よくある質問 Q&A（一部抜粋）

【02】 ROS/RNS　検出キット（品番：ENZ-51001-200）で、サンプルを最後の洗浄工程の後保存し、後日顕微鏡観察することはできますか？

いいえ、できません。マニュアル通り生細胞をすぐに観察する必要があります。

【03】ポジティブコントロールの蛍光シグナルが低い。

目的の活性酸素種が互いに反応して、予想されるシグナルを減衰させることがあります。 ROS は複雑な相互作用システムです。あるコンポーネントを別のコンポーネントがブロックし、シグナルの減少または増加を引き起こすことがあります。シグナル経路と培地などに含まれるすべてのコンポーネントをチェックしてください。

【04】インヒビターを使用しても蛍光シグナルが低下しない。

1. インヒビター濃度が低すぎる、もしくは高すぎる
インヒビター濃度が低すぎると ROS 誘導剤による ROS 産生に作用しないことがあります。またインヒビター濃度が高過ぎると酸化ストレス自体を引き起こし、蛍光シグナルを産生してしまいます。それぞれの細胞に合わせてインヒビターの濃度と前処理時間を最適化してください。

2. 検出のタイムポイントが適切でない
インヒビターの処理時間が長すぎる場合や ROS の誘導剤濃度が高すぎる場合、インヒビター効果が不十分になることがあります。検出時間と ROS 誘導剤の濃度を最適化してください。

3. 顕微鏡のフィルターセットが適切でない
それぞれの蛍光波長に適切なフィルターを使ってください。