ペプチドアレイの作製からデータ解析まで包括的に依頼可能！ エピトープマッピング解析受託サービス
RayBiotech社：ペプチドアレイの作製からデータ解析まで包括的に依頼可能！

エピトープマッピングは抗原上の抗体結合部位を同定するための手法ですが、受容体とリガンドのようなタンパク質間の相互作用解析にも使用されます。特異的な抗原結合領域や抗体のエピトープを決定することは抗体ベースの試験だけでなく、診断アプリケーション、ワクチン開発、タンパク質相互作用の解析、自己免疫疾患の研究等に有用です。

本サービスでは、お客様のご要望により重複ポリペプチド合成をデザインして合成します。このポリペプチドをネガティブコントロール（関連のないランダムペプチド）やポジティブコントロール（全長タンパク質）と共にガラススライド上に三重にアレイします。アレイをブロッキング後、重複ペプチドアレイに標的蛋白に対する一次抗体、ビオチン標識二次抗体を順次添加してインキュベートします。ウォシュ作業後にエピトープに結合した抗体を蛍光 Cy3 結合ストレプトアビジンによって検出します。各ペプチドスポットの蛍光はレーザースキャナーでキャプチャーし、強いシグナルを放つ陽性ペプチドを独自のソフトウェアで更に解析します（図1）。

（画像はクリックで拡大されます）

図1. エピトープマッピング解析の概要

• 包括的なサービスパッケージ
  タンパク質の配列と抗体又は抗血清をご送付頂ければ、アレイ試験の結果、ポジティブエピトープの配列等を掲載したレポートを納品。
• ハイスループットスクリーニング
  数百〜数千の重複エピトープを一度のアレイで同時にスクリーニング可能。
• カスタマイズ可能
  ニーズに応じてどのようなペプチドアレイにも対応可能。
• サンプル消費が少ない
  一度のアレイに数十 uL の抗体のみ使用。
• 迅速
  通常のアレイはデータ取得まで 6 時間。
• 高感度
  ビオチン-ストレプトアビジンと蛍光検出を組み合わせ高感度にエピトープシグナルを測定可能。
• 検出ダイナミックレンジが大きい
  Cy3 蛍光シグナルにより広い検出レンジを実現。

各アプリケーションをクリックすると、詳細をご覧いただけます。

• 高抗原性エピトープの検出
  ペプチドアレイスクリーニングにより、抗体が認識する抗原エピトープを同定できます。この同定されたエピトープのみを抗原として用いることにより、全長タンパク質を抗原として使用することによるクロスリアクションを最小化し、抗体を再生産することができます。
• 治療薬およびワクチン開発
  モノクローナル抗体及びその一本鎖抗体（scFV）誘導体は、その特異性と薬物動態学的特性により治療薬として盛んに利用されています。ペプチドアレイは起こりうる自然発生する抗原バリアントに対する結合特性や、他種への交差反応のメカニズムを理解するために強力で効率的なツールです。同定されたエピトープを用いることで、in vivo で交差反応が生じる可能性を制限できる抗原領域を免疫に使用することが可能です。
• 標的タンパク質に対する最適な抗体の選択
  モノクローナル抗体の作製において、抗体パネルは標的に対する特異性と結合活性により評価される必要があります。選択されたクローンをペプチドアレイにアプライすることで、それぞれのクローンのエピトープを同定し、結合親和性と特異性を比較することで研究に最適な抗体を選択することができます。
• 保存された抗原配列に対する種交差反応の調査
  ある抗体は標的抗体の重要な配列の類似性により、異なる種由来の同じタンパク質を認識することがあります。ペプチドアレイで抗体の正確なエピトープを決定することにより、種交差反応の有無を検証することが可能です。
• エピトープ変異解析
  エピトープが同定できるとアミノ酸置換や変異により、エピトープに必須なアミノ酸を特定可能であり、タンパク質間の結合領域も同定可能です。このことにより、in vivo における抗体の交差反応を制限することができ、モノクローナル抗体療法の自己免疫反応の制限や、in vivo で高い親和性を持つ抗体の同定に繋がります。
• 自己免疫疾患
  自己抗体が通常細胞を攻撃すると、直接的な溶解やサイトカイン関連細胞死、通常の細胞シグナル伝達や機能的パスウェイの阻害といったダメージが生じます。ペプチドマッピングアレイは自己抗体が結合する自己抗原エピトープを配置して、患者の自己免疫疾患反応を緩和する拮抗性エピトープの開発を促進します。

高密度ペプチドアレイは数百から数千の重複したペプチドを同時にスクリーニングできる効率的な手法です。RayBiotech 社の経験豊富な技術者がお客様の実験をデザインし、ペプチドアレイや解析をサポートします。

1. 重複ペプチドのデザイン
   重複エピトープのデザインには多くの手法があります。図2 の例をご参照下さい。
2. ペプチド合成
   RayBioteh 社は ug - mg オーダーの高純度（>95%）、脱塩ポリペプチドを提供します。
3. アレイプリンティング
   RayBioteh 社の最新鋭アレイヤーを用いてガラススライドにポリペプチドをプリントします。ペプチドライブラリーサイズにより 2, 4, 6, 8, 16 アレイ／スライドをご提供します。
4. アレイ試験サービス
   お客様の抗体や標的タンパク質を用いてペプチドアレイ試験を実施します。またご要望に応じてアレイキットを納品することも可能です。
5. データ解析
   アレイをスキャンして蛍光強度の検出、ノーマライズ、解析を行います。各エピトープへの特異的な結合は独自のソフトウェアにより評価します。

図2. エピトープ探索のための代表的な重複ポリペプチドデザイン

20 個のアミノ酸からなるタンパク質の場合、合成ペプチド長とオフセット残基数により、重複残基数とペプチドアレイのサイズが決定されます。例えば合成ポリペプチドを 10 mer にすると、2 残基のオフセットを持つ 6 種のポリペプチドか 4 残基のオフセットを持つ 4 種のポリペプチドの合成が必要になります。

ポジティブコントロールとしての抗原タンパク質は通常 0.1-0.5 ug 必要です。抗血清は 10-50 uL、精製抗体は 20-50 ug がアレイ試験に必要です。

下記のリンクから見積のご依頼をお願いいたします。

• サンプルは緩衝材を入れた発泡スチロール製保冷箱に入れ、ドライアイスを十分入れてご送付ください。
• チューブの破損やクロスコンタミネーションに十分ご注意下さい。
• チューブには必ずラベルや油性マジックでサンプル名を記載し、他のチューブと判別できるようにご注意下さい。
• ご送付は宅急便等で下記宛先まで冷凍便にてご送付ください。なお、サンプルの紛失を避けるために事前に jutaku_gr@cosmobio.co.jp までご送付日、配送業者名、お問合せ番号をお知らせください。

ご提供いただくサンプルについては、インフォームド・コンセントが取得されており、かつドナーの個人情報が特定できないように匿名化されたものである必要がございます。

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