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本商品は、ビーズ標識抗CD63捕捉抗体および蛍光色素標識抗CD9検出抗体・抗CD81抗体を使用して、フローサイトメトリーでエクソソームを検出/定量できる簡単な免疫ビーズアッセイです。再現性のある結果を提供し、エクソソームのimmunophenotypingと並行して実施することができます。
背景
エクソソームは、エンドサイトーシスにより多胞性エンドソーム1が形成され、細胞から放出されることで形成される細胞外小胞です。エクソソームは、タンパク質・脂質・mRNA・miRNA・DNAを細胞間で運搬することで細胞間の伝達を担い2,3、これにより、いくつかの疾患やがん転移に関連していると考えられています。また、がん微小環境4と免疫応答5,6を制御する可能性も示唆されています。
特長
- 特異性が高い正確なエクソソーム検出
- 定量分析、蛍光とエクソソーム量の優れた相関性
- 細胞培養上清からのエクソソームを直接検出*
- 少量のサンプルから検出可能
- 高感度、広いダイナミックレンジ
- 補足したエクソソーム集団を同時にimmunophenotyping
* 各検体から直接エクソソームを定量するプロトコールは以下をご参照ください。
構成内容
- 抗CD63抗体結合 超常磁性捕捉ビーズ
- ビオチン標識 抗CD9抗体 or ビオチン標識 抗CD81抗体
- フィコエリスリン (PE) 標識ストレプトアビジン
- 凍結乾燥エクソソーム（転移性癌細胞株由来のPC-3ヒト前立腺癌細胞より）
- 10× アッセイバッファー
エクソソームの検出手順
図1. 免疫ビーズアッセイによるエクソソームのimmunophenotyping手順
超遠心法などで精製・濃縮したエクソソーム* をCD63補足ビーズと混合し、室温でオーバーナイト、インキュベートする。ここへ一次検出抗体（CD9ビオチン/CD81ビオチン）を結合し、アッセイバッファーで洗浄したあと、二次検出試薬としてPE標識ストレプトアビジンを加え、インキュベーションおよび洗浄後フローサイトメトリーにより解析。
* 細胞上清サンプルの場合は、精製ステップなしで直接検出も可能。
製品データ
図2. ExoStepに結合したエクソソームのフローサイトメトリー解析
PC3細胞培養上清より精製・濃縮したエクソソームをPBSに再懸濁し、CD63補足ビーズと混合して一晩室温でインキュベートした。翌日、ビーズ結合エクソソームを一次検出抗体（CD9ビオチン/ CD81ビオチン）およびストレプトアビジン-PEで間接的に染色し、フローサイトメトリー解析を行った。
図3. ExoStepダイナミックレンジ
ExoStepのダイナミックレンジ（0-128 µg）を示すフローサイトメトリーヒストグラム
サンプル：PC3細胞株由来エクソソーム
図4. 競合他社間の感度比較
参考文献
- Yáñez-Mó M, Siljander P, Andreu Z, Bedina Zavec A, Borràs F, Buzas E et al. Biological properties of extracellular vesicles and their physiological functions. Journal of Extracellular Vesicles. 2015;4(1):27066.
- Pitt JM, André F, Amigorena S, Soria JC, Eggermont A, Kroemer G, Zitvogel L. Dendritic cell-derived exosomes for cancer therapy. J Clin Invest. 2016.
- Tkach M, Théry C. Communication by Extracellular Vesicles: Where We Are and Where We Need to Go. 2016 Cell 10;164(6):1226-32.
- Becker A, Thakur BK, Weiss JM1, Kim HS, Peinado H, Lyden D Extracellular Vesicles in Cancer: Cell-to-Cell Mediators of Metastasis. Cancer Cell 2016 Dec 12;30(6):836-848.
- López-Cobo S, Campos-Silva C, Valés-Gómez M. Glycosyl-Phosphatidyl-Inositol (GPI)-Anchors and Metalloproteases: Their Roles in the Regulation of Exosome Composition and NKG2D-Mediated Immune Recognition. Front Cell Dev Biol. 2016 Sep 12;4:97.
- Jonathan M. Pitt, Guido Kroemer, Laurence Zitvogel Extracellular vesicles: masters of intercellular communication and potential clinical interventions. 2016 J Clin Invest. 2016;126(4):1139-1143
- Théry C, Amigorena S, Raposo G, Clayton A. Isolation and Characterization of Exosomes from Cell Culture Supernatants and Biological Fluids. Current Protocols in Cell Biology. 2006
ExoStep™ Cell culture
ヒト培養細胞から精製・濃縮したエクソソームをフローサイトメトリーでimmunophenotypingするキットです。
| 品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
|---|---|---|---|---|
ExoStep Cell Culture, Human, Phycoerythrin |
ISP | EXOS-25-C9 | 25 TEST |
￥151,000 |
ExoStep™ Plasma
ヒト血漿から精製・濃縮したエクソソームをフローサイトメトリーでimmunophenotypingするキットです。
| 品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
|---|---|---|---|---|
| ExoStep Plasma, Human, Phycoerythrin |
ISP | EXOS-25-P81 | 25 TEST |
￥151,000 |
ExoStep™ Urine
ヒト尿から精製・濃縮したエクソソームをフローサイトメトリーでimmunophenotypingするキットです。
| 品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
|---|---|---|---|---|
| ExoStep Urine, Human, Phycoerythrin |
ISP | EXOS-25-U9 | 25 TEST |
￥151,000 |
【関連商品】
| 品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
|---|---|---|---|---|
| Lyophilized Exosome Standards from PC-3 cell line, Human |
ISP | EXOPC3 | 100 UG |
￥76,000 |
| CD9 Capture Beads for Flow Detection |
ISP | 9CB-25 | 25 TEST |
￥78,000 |
| CD63 Capture Beads for Flow Detection |
ISP | 63CB-25 | 25 TEST |
￥78,000 |
| CD81 Capture Beads for Flow Detection |
ISP | 81CB-25 | 25 TEST |
￥82,000 |
| CD326 (EpCAM) Capture Beads for Flow Detection |
ISP | 326CB-25 | 25 TEST |
￥82,000 |
| Anti CD63, Human (Mouse) Biotin, TEA3/18 |
ISP | 63BEXO-25 | 25 TEST |
販売終了 |
| Anti CD63, Human (Mouse) Fluorescein Isothiocyanate, TEA3/18 |
ISP | 63FEXO-25 | 25 TEST |
販売終了 |
| Anti CD63, Human (Mouse) Phycoerythrin, TEA3/18 |
ISP | 63PEEXO-25 | 25 TEST |
販売終了 |
| Anti CD63, Human (Mouse) CFTM Blue, TEA3/18 |
ISP | 63CFEXO-25 | 25 TEST |
販売終了 |
| Anti CD9, Human (Mouse) Biotin, VJ1/20 |
ISP | 9BEXO-25 | 25 TEST |
販売終了 |
| Anti CD9, Human (Mouse) CFTM Blue, VJ1/20 |
ISP | 9CFEXO-25 | 25 TEST |
販売終了 |
| Anti CD9, Human (Mouse) Fluorescein Isothiocyanate, VJ1/20 |
ISP | 9FEXO-25 | 25 TEST |
販売終了 |
| Anti CD9, Human (Mouse) Phycoerythrin, VJ1/20 |
ISP | 9PEEXO-25 | 25 TEST |
販売終了 |
| Anti CD81, Human (Mouse) Biotin, M38 |
ISP | 81BEXO-25 | 25 TEST |
販売終了 |
| Anti CD81, Human (Mouse) CFTM Blue, M38 |
ISP | 81CFEXO-25 | 25 TEST |
販売終了 |
| Anti CD81, Human (Mouse) Fluorescein Isothiocyanate, M38 |
ISP | 81FEXO-25 | 25 TEST |
販売終了 |
| Anti CD81, Human (Mouse) Phycoerythrin, M38 |
ISP | 81PEEXO-25 | 25 TEST |
販売終了 |
| Anti CD326, Human (Mouse) Biotin, VU-1D9 |
ISP | 326BEXO-25 | 25 TEST |
販売終了 |
| Anti CD326, Human (Mouse) Fluorescein Isothiocyanate, VU-1D9 |
ISP | 326FEXO-25 | 25 TEST |
販売終了 |
| Anti CD326, Human (Mouse) Phycoerythrin, VU-1D9 |
ISP | 326PEEXO-25 | 25 TEST |
販売終了 |
商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。
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