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ホタルルシフェラーゼアッセイキット Luc-Pair™ Firefly Luciferase HS Assay Kit（高感度）

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メーカー名：GeneCopoeia, Inc.

Luc-Pair™ Firefly Luciferase HS Assay Kit は、ホタルルシフェラーゼ（FLuc）活性を高感度に検出できるキットです。

様々な真核細胞（哺乳動物、無脊椎動物など）を用いたアッセイに使用でき、マイクロプレート／シングルチューブルミノメーターを用いて測定します。GeneCopoeia社、Promega社などの多くの Fluc ベクターに対応します。

Luc-Pair™ ルシフェラーゼアッセイキット　選択ガイド

背景

ルシフェラーゼについて

レポーター遺伝子発現を用いた転写調節解析は、細胞生物学や医薬品開発で一般的に利用されています。ルシフェラーゼは、以下の利点を持っており、遺伝子発現研究で最も広く使用されるレポーター遺伝子です。

広いダイナミックレンジ・高感度
哺乳類細胞に存在しない
一貫性・再現性
費用対効果の高さ
簡便なアッセイ
ハイスループットスクリーニングに最適

ホタル由来のルシフェラーゼ

ホタル（Photinus pyralis）由来のルシフェラーゼは、簡便で迅速、高感度なアッセイが可能であるため広く使用されています。ホタルルシフェラーゼは、プロモーター活性や転写後調節の両方をモニターするために最適なレポーターで、61kDaの細胞質酵素です。発光強度は、ルシフェラーゼ量に比例し、ルミノメーターまたは多機能マイクロプレートリーダーを用いて測定されます。

図1. ホタルルシフェラーゼの触媒反応

ルシフェラーゼアッセイでは、目的遺伝子に近接するシスエレメントの転写活性をモニターすることができます。しかしながら、miRNAによる標的遺伝子3'UTR領域の調節を介した転写抑制効果の測定に関しては、その酵素基質活性の範囲が小さいために今まで困難でした。真の転写抑制効果をモニターするためには、より長期間安定な酵素基質複合体が必要です。

また、生物学的ばらつきや確率論的現象がノイズとして結果に影響します。実際のシグナルと非特異的な応答を区別するためには、独立したコントロールレポーターを用いてレポーター遺伝子の発現を標準化します。これは、トランスフェクション効率や細胞生存率の補正にも必要です。

特長

高感度 - ホタル（Firefly）ルシフェラーゼシグナルを高感度に検出（図1）
多用途 - 様々な真核細胞（哺乳動物、無脊椎動物など）を用いたアッセイに使用でき、マイクロプレート／シングルチューブルミノメーターを用いて測定
低いバックグラウンド - バックグラウンドが非常に低く、減算が不要
再現性 - 広い範囲で線形性が保たれた信頼性の高い結果

構成内容

FLuc-Lysis Buffer (10×) ：細胞溶解バッファー
FLuc-H Buffer (5×) ：ホタル（Firefly）ルシフェラーゼバッファー
FLuc-H Sub (100×) ：ホタル（Firefly）ルシフェラーゼ基質

製品データ

図1 ホタル（Firefly）ルシフェラーゼ活性
HEK 293 細胞に、Promega社 pGL4.13 レポーターベクターを48時間トランスフェクションした。プロトコールに従い、FLuc (FLuc-GeneCopoeia) 活性を測定した。他社のキット（FLuc-他社）を比較のために用いた。

図2 ルシフェラーゼシグナルの安定性
Promega社 pGL4.13 レポーターベクターを、HEK 293 細胞に48時間トランスフェクションした。プロトコールに従い、FLuc (FLuc-GeneCopoeia) 活性を測定した。分注装置を用いて Fluc 溶液を添加し、1秒間振とうして混合した後、速やかに20秒間測定した。

Luc-Pair™ Firefly Luciferase HS Assay Kit（高感度）

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Luc-Pair^TM Firefly Luciferase HS Assay Kits (100rxns)	GCP	LF007	100 RXN	￥19,000
Luc-Pair^TM Firefly Luciferase HS Assay Kits (300rxns)	GCP	LF008	300 RXN	￥31,000
Luc-Pair^TM Firefly Luciferase HS Assay Kits (1000rxns)	GCP	LF009	1000 RXN	￥92,000

ベクターオプション

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Firefly luciferase (FLuc) and Renilla luciferase (Rluc) reporter cloning vector	GCP	ZX001	10 UG	￥121,000
Firefly luciferase (FLuc) and Renilla luciferase (Rluc) reporter cloning vector	GCP	ZX002	10 UG	￥121,000
Firefly luciferase (FLuc) and Renilla luciferase (Rluc) reporter cloning vector	GCP	ZX003	10 UG	￥121,000

Luc-Pair™ ルシフェラーゼアッセイキット　ラインアップ

選択ガイド
	ベクター	Luc-Pair™ Luciferase Assay Kit
	ベクター	Duo-Luciferase Assay Kit 2.0	Duo-Luciferase HS Assay Kit	Firefly Luciferase HS Assay Kit	Renilla Luciferase HS Assay Kit
レポーター遺伝子		ホタル・ウミシイタケルシフェラーゼ	ホタル・ウミシイタケルシフェラーゼ	ホタルルシフェラーゼ	ウミシイタケルシフェラーゼ
主な特長		安定性が向上	高感度	高感度	高感度
miTarget™ 3′ UTR miRNA Target Clones	pEZX-MT05
miTarget™ 3′ UTR miRNA Target Clones	pEZX-MT06
GeneCopoeia社ベクターオプション	pEZX-FR01 （品番： ZX001）
	pEZX-FR02 （品番： ZX002）
	pEZX-FR03 （品番： ZX003）
Promega社ベクターオプション	pGL4 Luciferase Reporters vectors
Promega社ベクターオプション	pmirGLO Dual-Luciferase miRNA Target Expression Vectors