洗浄不要！TR-FRET法によりサイクリックAMP濃度を測定 Screen Quest™ TR-FRET No Wash cAMPアッセイキット

本製品はTR-FRETを利用し、特異的かつ高感度にcAMPの活性をモニタリングできるキットです。

環状3’,5’ アデノシン一リン酸（Adenosine 3’, 5’ cyclic monophosphate、cAMP）は細胞内シグナル伝達における重要なセカンドメッセンジャーです。cAMPレベルのモニタリングは、GPCRのアゴニストやアンタゴニストをスクリーニングする一般的な手法の一つです。

本製品は、Gタンパク質共役受容体システムにおけるアデニル酸シクラーゼの活性をモニタリングするための便利なアッセイ法を提供します。他のcAMP ELISA アッセイキットと比較して、このホモジニアスなcAMPアッセイキットでは洗浄またはアセチル化の工程が不要です。
本アッセイでは、Anti-cAMP抗体はtrFluor™ Euで標識されており、一方のcAMPトレーサーはtrFluor™ 650で標識されています。cAMPが存在しない場合、cAMP-trFluor™ 650コンジュゲートはtrFluor™ Eu標識 anti-cAMP抗体に独占的に結合し、622nmで強いTR-FRET放出を示します。しかし、テストサンプル中に存在するフリーcAMPがtrFluor™ Eu標識 anti-cAMP抗体コンジュゲートに競合すると、cAMP-trFluor™ 650とtrFluor™ Eu標識 anti-cAMP抗体との結合が妨げられます。trFluor™650標識 cAMPトレーサーのみの蛍光寿命はナノ秒程度ですが、一方のtrFluor™ Eu標識 anti-cAMP抗体と蛍光cAMPトレーサーの結合体は、TR-FRETにより非常に長い蛍光寿命値を示します。TR-FRETの強度はサンプル中のcAMP濃度に比例します。

• TR-FRETを利用し、特異的かつ高感度にcAMP活性をモニタリング
• 洗浄／アセチル化工程が不要のためハイスループットスクリーニングに最適
• 便利な96ウェルプレートおよび384ウェルプレートフォーマットで使用可能

• コンポーネントA：Anti-cAMP抗体（trFluor™ Eu標識）
• コンポーネントB：cAMP-trFluor™ 650（トレーサー）
• コンポーネントC：cAMPスタンダード
• コンポーネントD：細胞溶解バッファー
• コンポーネントE：希釈液

図1. cAMP投与反応をTR-FRET cAMPアッセイキットで測定
ClarioStar マイクロプレートリーダー（BMG LABTECH社）で測定した。1nM の低濃度cAMPも検出可能。

図2. TR-FRETのシグナル減少をTR-FRET cAMPアッセイキットで検出 
cAMPの分泌を増加させるため、フォルスコリンによってpre-activated状態のHEK細胞を使用した。

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