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記事ID ： 16975
研究用

ハイスループットMALDI-TOF MS解析にも対応 LudgerTag™ 糖鎖パーメチル化キット

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メーカー名：Ludger Ltd.

本商品は、従来法と比較し少ない作業量で糖鎖をパーメチル化するキットです。
96ウェルプレートのフォーマットで、マニュアルアッセイおよびオートメーションアッセイ（ハイスループット）に対応可能です。

Ludger社 糖鎖解析商品一覧

特長

  • MALDI質量分析用サンプル調製に
  • N-/O-結合型糖鎖どちらの解析にも適用
  • ハイスループット用のオートメーションアッセイに対応
  • 適用サンプル：PNGase F、PNGase A、β脱離またはヒドラジン分解のいずれかによって遊離された非標識精製糖鎖
  • 標識サンプル数：96サンプル
  • サンプル当たりの必要糖鎖量： 1 µg

 

従来の方法

種類 内容／デメリット 参考
スラリー法
  • 水酸化ナトリウムにDMSOを加えたスラリーを用いる
  • サンプルバイアルに添加する際、都度ボルテックスを行う
    必要があるため時間が掛かり作業量も多く、多量の
    サンプルを処理するには不向き
 LUD_LTPERMET96_1.jpg
固相法
  • 近年開発された方法
  • 反復作業が多く多量のサンプルを処理するには不向き
    （特性評価、バイオ製剤など）
  1. Pilsoo Kang, Y. M. and M. V. N. RAPID Commun. MASS Spectrom. 2008, 22, 721–734.
  2. Jeong, H.-J.; Kim, Y.-G.; Yang, Y.-H.; Kim, B.-G. Anal. Chem. 2012, 84 (7), 3453–3460.
  3. Gao, X.; Zhang, L.; Zhang, W.; Zhao, L. Analyst 2015, 140 (5), 1566–1571.

構成内容

  1. 誘導体化試薬
    • DMSO
  2. 液液抽出
    • ジクロロメタン

※ ヨウ化メチル（ヨードメタン）はキットに含まれておりませんので、お客様自身でご準備頂く必要がございます。

ワークフロー

Step 1. サンプルのパーメチル化

  • 糖鎖の調製 (必要に応じて)
  • DMSOおよびサンプルのパーメチル化プレートへの添加
  • インキュベーション
  • MeI のメチル化プレートへの添加
  • インキュベーション

 

Step 2. パーメチル化サンプルの抽出及び保存

  • サンプルの抽出
  • 乾燥
  • 70% MeOH の添加

ワークフローにおける推奨商品

 製品名  品番 対応表
N-グリカン O-グリカン
PNGase F
N-glycan release		 E-PNG01 ●  
Hydrazinolysis/Orela
O-glycan release kit		 LL-HYDRAZ-A2   ●
LL-ORELA-A2   ●
Enrichment plate LC-PERMET-96 ●  
Cation exchange
clean-up cartridges		 LC-CEX-A6   ●
Permethylation kit (without methyl iodide) LT-PERMET-VP96 ● ●

※HydrazinolysisはNグリカン除去にも使用可能ですが、ワークフローではPNGase Fを推奨しています。

icon_arrow_down_01.gif 商品詳細

使用例

ヒトIgG N-グリカンにおけるパーメチル化と2-AB標識によるプロファイルの比較

PNGase F 除去および精製済みヒトIgG N-グリカンの解析

図1. PNGase F 除去および精製済みヒトIgG N-グリカンの解析
(A)パーメチル化処理サンプルのMALDI-TOF-MSスペクトル (B)2-AB標識　HILIC UHPLC クロマトグラム

オートメーションハイスループットでパーメチル化処理したサンプルとUHPLC解析（蛍光検出）より得られたデータを比較する。 13種類の主要N型糖鎖のピークについて、シグナルを統合・正規化し、相対強度および標準偏差を計算したところ、相対強度が高い（4%以上）のピークでは、両方の手法間で相関が見られた。
この結果より、パーメチル化キットでも短時間で信頼性の高いグリコシル化プロファイルを得られることが分かった。

 

パーメチル化によるシアル酸の安定化

A3糖鎖（A3G3S3：N-グリカンの標準品）のグリコシル化プロファイルの比較
図2. A3糖鎖（A3G3S3：N型糖鎖の標準品）のグリコシル化プロファイルの比較（リキッドハンドリングロボットによりサンプル調製）
(A)パーメチル化サンプルのMALDI-TOF MSスペクトラム
(B)プロカインアミド標識付きサンプルのHILIC UHPLCクロマトグラム（蛍光検出）
(C)トリアンテナリー（triantennary）のピーク値の相対的強度をヒストグラム化し比較
脱シアル化構造（H6N5S2）とトリシアル化構造（H6N5S3）について三連で測定し解析を行った。その結果、ヒストグラムではMALDI-TOF MSとHILIC UHPLC解析で同程度の相関性のあるシグナル強度が確認された。エラーバーは標準偏差を示す。

LudgerTag™ 糖鎖パーメチル化キット

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Permethylation kit without methyl iodide詳細データ LUD LT-PERMET-VP96 96 TEST
 ￥219,000

関連商品

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
PNGase F (Peptide N Glycosidase F)詳細データ LUD E-PNG01 0.3 UNIT
[60 μl] 		￥158,000
Ludger Liberate Hydrazinolysis Kit詳細データ LUD LL-HYDRAZ-A2 2 SET
[6 samples/set] 		￥276,000
Ludger Liberate Orela Kit詳細データ LUD LL-ORELA-A2 2 SET
[6 samples/set] 		￥193,000
LudgerClean Plate for pre-Permethylation Clean Up詳細データ LUD LC-PERMET-96 96 WELL
 ￥64,000
LudgerClean CEX cartridges for purification of O-glycans詳細データ LUD LC-CEX-A6 6 EACH
[6_カートリッジ入り] 		￥68,000

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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