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シールドペプチドにより in vivo トランスフェクション効率を向上 in vivo 用トランスフェクション試薬　GenJet™ Plus / PepJet™

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メーカー名：SignaGen Laboratories

SignaGen Laboratories（シグナジェンラボラトリーズ／SGL）社の in vivo 用に開発された新しいトランスフェクション試薬です。

GenJet™ Plus DNA in vivo トランスフェクション試薬
PepJet™ DNA in vivo トランスフェクション試薬

背景

通常、正に帯電したトランスフェクション試薬は、in vitro で高い遺伝子導入活性を示しますが、全身投与に用いるにはかなり制限があります。正に帯電した脂質およびポリプレックスを、マウスに尾静脈注射すると、複合体は血流から急速に取り除かれ、細胞外成分との非特異的な結合により、主に肺に蓄積します。

図1 in vivo DNA トランスフェクション用試薬 GenJet™ Plus の模式図

血液中を循環する際の、カチオン性非ウイルスベクターと血液成分の非特異的な相互作用を防ぐために、GenJet™ Plus 試薬を骨格、および、シールドペプチド（SP）と中性脂質のアミン基との架橋構造に使用しています。テストの結果、シールドペプチドを含む GenJet™ Plus の投与は、赤血球凝集反応を誘導しないことを示しました。さらに、シールドペプチドを含む GenJet™ Plus を全身投与すると、シールドペプチドを含まないコントロールの GenJet™ Plus と比較して、ウミシイタケルシフェラーゼ発現が肺、脾臓、肝臓において有意に向上し、全身への循環が認められました。

GenJet™ Plus DNA in vivo トランスフェクション試薬

GenJet™ Plus DNA in vivo トランスフェクション試薬は、in vitro トランスフェクション試薬（品番： SL100499）に、数種類の独自のペプチドを加えた組成となります。オリジナルの組成と比較して、DNA の凝集が優位に増加します。また、in vivo 環境での干渉を防ぎ、in vivo トランスフェクション効率を向上させるために、シールドペプチドが骨格に結合されています。GenJet™ Plus は、肺、脾臓、肝臓、腎臓において、良好なウミシイタケルシフェラーゼの発現を示すことが確認されています。

図2　GenJet™ Plus を使用した、ウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子を含むプラスミドのデリバリー効率（マウス）

表1　注入経路による推奨 DNA 量（マウス）
動物	注入部位	推奨 DNA 量	推奨注入量
マウス（成体）	尾静脈	50 μg	200 - 400 μL
	眼窩後	60 μg	200 μL
	門脈	100 μg	500 μL
	腹腔内	100 μg	600 μL
	脳室	1 μg	5 μL
	心臓	50 μg	200 μL
	肺滴下	50 μg	400 - 600 μL
	皮下腫瘍	20 μg	100 μL

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
GenJet^TM Plus DNA In Vivo Transfection Reagent	SGL	SL100500	0.1 ML	￥7,000
GenJet^TM Plus DNA In Vivo Transfection Reagent	SGL	SL100500	0.5 ML	￥28,000
GenJet^TM Plus DNA In Vivo Transfection Reagent	SGL	SL100500	1 ML	￥55,000

PepJet™ DNA in vivo トランスフェクション試薬

PepJet™ DNA in vivo トランスフェクション試薬は、DNA デリバリーツールに基づく新しいカチオン性ペプチドです。この28アミノ酸からなる長いペプチドは、in vivo での DNA デリバリーの際に、強力なベクターとして認識されます。ペプチドの合成・精製・スクリーニング・検証は、タンパク質アライメント／シミュレーションソフトウェアを使用して、ウイルスタンパク質をシミュレートすることにより行いました。また、in vivo 環境での干渉を防ぎ、in vivo トランスフェクション効率を向上させるために、シールドペプチドが骨格に結合されています。PepJet™ は、肺、肝臓、脾臓、腎臓において良好なウミシイタケルシフェラーゼ発現を示すことが確認されています。

図3　PepJet™ を使用した、ウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子を含むプラスミドのデリバリー効率（マウス）

表2　注入経路による推奨 DNA 量（マウス）
動物	注入部位	推奨 DNA 量	推奨注入量
マウス（成体）	尾静脈	50 μg	200 - 400 μL
	眼窩後	60 μg	200 μL
	門脈	100 μg	500 μL
	腹腔内	100 μg	600 μL
	脳室	1 μg	5 μL
	心臓	50 μg	200 μL
	肺滴下	50 μg	400 - 600 μL
	皮下腫瘍	20 μg	100 μL

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
PepJet^TM DNA In Vivo Transfection Reagent	SGL	SL100501	0.1 ML	￥8,000
PepJet^TM DNA In Vivo Transfection Reagent	SGL	SL100501	0.5 ML	￥37,000
PepJet^TM DNA In Vivo Transfection Reagent	SGL	SL100501	1 ML	￥71,000