血液サンプルから核酸を連続精製 血漿・血清用 RNA／DNA Purification Mini Kit

血漿／血清サンプルからRNAおよびDNAを連続精製可能なキットです。

本製品は、血漿／血清サンプルからDNA（血液循環DNA；Cell‐Free Circulating DNA，cfc‐DNA）およびRNA（血液循環RNA，エクソソーム由来RNA）を連続的に分離可能な、迅速・簡便性、信頼性、再現性に優れたキットです。 Norgen（NOG／ノルジェン）社独自の分離マトリクス樹脂を用いた新しいスピンカラムは、10μLから200μLという少量の血漿／血清サンプルからでもRNAおよびDNAの抽出を可能にします。また、本製品は凍結または新鮮な血漿／血清サンプルから様々なサイズの血液循環RNAやエクソソーマルRNA、血液循環DNA(cfc-DNA)を分離できます。また、他社品と比較し、Norgen社キットはフェノール／クロロホルム処理やプロテアーゼ処理を必要としません。RNAおよびDNAは最終的に10μLから25μLで溶出されます。

※なお、血液検体の凝固剤はEDTAまたはクエン酸をご使用ください。本キットは血清および血漿（EDTAまたはクエン酸処理）中のRNA／DNAの分離に適しています。ヘパリンは、RT-PCR等下流のアプリケーションに影響し、除去する方法が確立されていないため推奨できません。

■ DNA／RNA精製後のアプリケーション

■ 使用方法

• フェノール／クロロホルム抽出不要
• 30分間の迅速プロトコルで高品質なDNA／RNAを分離
• 血液循環RNAやエクソソームRNAを含む全サイズのRNAを分離
• 様々なサイズの血液循環DNAを分離（>50bp）
• 少量のサンプル量にも対応（10-200μl の血漿／血清サンプル）
• RNA／DNAの濃縮に（10-25μｌの最終溶出量）
• 精製後RNA／DNAは種々のアプリケーションに使用可能

＜その他用途＞

• ウイルスおよびバクテリア由来のDNA／RNAの分離
• ゲノムDNA、牛乳中のウイルスDNAにも使用可能

• Lysis Buffer A　30ML
• Wash Solution A　38ML
• Elution Solution A　6ML
• Elution Buffer B　8ML
• Micro Spin Columns　50個
• Collection Tubes 100本
• Elution tubes (1.7 mL)　100本

*血液循環RNAやエクソソームRNA，cfc-DNAの収量は、サンプル量や検体の個体差に左右されます。

図1.　血漿サンプル量の違いによるRNA量の比較
EDTA処理した血漿サンプル（50μL, 100μL, 200μL）から血液循環RNAを精製した。精製RNAを鋳型にmiR-21(図1A)およびハウスキーピング遺伝子5s rRNA（図1B）をRT-PCRによって測定した。miR-21および5s rRNAの転写産物はサンプル量に応じて直線的に増加した。

図2.　溶出バッファー量の違いによるRNA抽出効率の検討
EDTA処理した血漿サンプルを200μL用いて、異なる溶出容量（10μL，15μL，25μL）によってRNA抽出を行った。 精製RNAを鋳型にmiR-21（図2A）およびハウスキーピング遺伝子5s rRNA（図2B）についてRT-PCRによって測定した。 溶出バッファーの量を減らすことによって、いずれのRNAについても効率よく濃縮できた。

図3. 他社製品との比較
図3A．Norgen（NOG）社キットおよび各社RNA精製キットを用いて精製したRNAを鋳型にmiR-21についてRT-PCRを行った。NOG社キットは他社品と比較して高効率で分離・精製することがわかる。
図3B．NOG社キットおよび各社DNA精製キットを使用して精製したDNAを鋳型に5S rRNA 遺伝子について定量PCRを行った。NOG社キットは他社品と比較して高効率で分離・精製することがわかる。

図4. PCR反応を阻害する夾雑物の影響
Norgen（NOG）社キットおよび各社DNA精製キットから抽出したDNAについて、異なる鋳型量(3μL, 6μL, 9μL)を用いて5S rRNA遺伝子を定量的PCRで測定した。鋳型量を増やした際のCt値の上昇は、PCR阻害を起こす夾雑物の増加が影響している。NOG社キットでは、鋳型量を増やした場合においても、PCR反応への影響は見られなかった。

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