コントロール抗原として使用する組換えタンパク質フラグメント PrEST 抗原

perst Antigen™は、Triple A Polyclonals™ および PrecisA Monoclonals™ の製造用免疫原として使用される組換えタンパク質フラグメントです。 perst抗原は、コントロール抗原として、対応する抗体と一緒にブロッキング剤および陽性コントールとして有用です。

Atlas Antibodies社の一次抗体は、組換えヒトタンパク質エピトープシグネチャータグ（PrEST）に由来します。
これらのタンパク質フラグメントは50〜150アミノ酸で構成されており、他のヒトタンパク質と配列同一性が限りなく少ないように設計されています。
PrEST抗原は、Triple A ポリクローナル抗体および PrecisA モノクローナル抗体の製造用免疫原として使用されています。得られた抗体は、タグに特異的な抗体を除去し、PrEST特異的抗体を捕捉するために、PrEST抗原に対して3段階のアフィニティー精製が実施されます。コントロール実験用として、Atlas Antibodies社の抗体を相補するものとしてPrEST抗原を提供しています。

IHCの前吸着アッセイ

PrEST抗原のアプリケーションの1つは、免疫組織化学 (IHC) での前吸着アッセイです。この画像は、対応するperst抗原による抗体の事前吸着後のIHC染色結果を示しています。この画像は、ヒト腎臓を抗PLA2R1抗体 (品番AMAb90772) で染色しています。これは、PLA2R1 PrEST抗原 (品番APrEST72110) による事前吸着なし (左) とあり (右) です。

ウェスタンブロットの前吸着アッセイ

PrEST抗原は、ウエスタンブロットで対応する抗体の事前吸着に役立ちます。この画像は、ヒト肝臓溶解物を抗ALDH1A2抗体 (品番HPA010022) でウエスタンブロットした図です。ALDH1A2 PrEST抗原 (APrEST71490) による事前吸着なし (左) とあり (右) です。

ウェスタンブロットのポジティブコントロール

PrEST抗原は、ウエスタンブロットアッセイのポジティブコントロールとして使用可能です。この画像は、0.5〜50ナノグラム (右から左) の範囲のローディングコントロールとして AQP4 PrEST高原 (品番APrEST73067) をロードし、抗AQP4抗体 (品番HPA014784) でウエスタンブロットをした図です。

タンパク質フラグメントは、連鎖球菌プロテインGに由来する免疫増強アルブミン結合タンパク質 (ABP) タグをもつフレーム内のヘキサヒスチジル (His6) タグからなる二重タグを備えた融合タンパク質として発現されます。
50〜150アミノ酸残基のフラグメントを使用すると、クローニングとタンパク質発現が容易になり、短いペプチドでは取得できなかったコンフォメーションエピトープも得られます。このタンパク質特異的フラグメントは、高い特異性の抗体の生成をトリガーするのに適したネイティブタンパク質に存在する固有のエピトープを含むように独自のソフトウェアを用いて選択されます。
高い特異性は、完全なヒトゲノムスキャンによって行われ、他のヒトタンパク質との相同性が最も低い領域が、抗体の生成のための抗原として使用されることを保証します。さらに、シグナルペプチドと膜領域は設計で回避されています。

PrESTのクローニングには、RT-PCRアプローチで多数のヒト組織に由来するRNAのプールが使用されます。増幅された遺伝子断片はクローン化され、配列が検証されます。クローンの発現には大腸菌組換えタンパク質発現システムを使用し、ニッケル含有マトリックス (IMAC) を使用して生成物を精製します。
発現した PrEST抗原は、ESI質量分析で検証されます。純度はSDS PAGEで分析され、PrEST抗原量は Nanodropシステムにより定量化されています。

IHC、IHC、およびWBでの事前吸着アッセイでコントロール抗原としてPrEST抗原を使用する方法はこちらよりご覧ください。

関連情報

• Atlas Antibodies社 ポリクローナル抗体／モノクローナル抗体
• Precis A モノクローナル抗体
• Triple A ポリクローナル抗体

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