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Staphylococcus aureus 由来、分子量の小さい Cas9 タンパク質 saCas9 Nuclease Protein

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メーカー名：Applied Biological Materials Inc.

saCas9 とは、Staphylococcus aureus（黄色ブドウ球菌）に由来し、従来の spCas9（Streptococcus pyogenes Cas9）と比較して分子量の小さい Cas9 です。SpCas9 はPAMとして 5’-NGG-3’ 配列を認識しますが、SaCas9 は 5’-NNGRRT-3’（RはAまたはG）配列を認識します。

ゲノム編集概論は以下のWEB記事をご参照ください

FAQ　「iCRISPR-Cas9 ゲノム編集用製品　 FAQ」

背景

CRISPR/Cas9 システムは、RNA依存性DNAエンドヌクレアーゼを利用した、特異的なゲノムの破壊や置換などを可能にする最新のゲノム編集技術です。

Cas9 ヌクレアーゼは、ガイド配列を持つ sgRNA（single-guide RNA）依存的に任意のDNA配列を認識することにより、PAM（protospacer adjacent motifs）と呼ばれる特定の配列の近傍のゲノムDNAを切断します。
二本鎖DNAの切断は非相同末端結合（NHEJ: non-homologous end joining）により修復されますが、CRISPR-Cas9 が過剰に発現していることによりエラーが生じ、遺伝子の欠失や挿入が起こることでORF（open reading frame）が破壊されて標的遺伝子はノックアウトされます。また、修復に適した相補鎖があれば相同組み換え修復（HDR: homology-directed repair）が起こりますので、これを利用して目的の配列を持つ遺伝子断片を導入してノックインを誘導することも可能です。

Streptococcus pyogenes（化膿レンサ球菌）由来の spCas9 は、PAM配列の利便性から非常に使いやすいツールとして広く用いられていますが、一方でサイズの大きさからウィルスベクターへの導入効率が課題となっていました。Staphylococcus aureus 由来の saCas9 は、spCas9 よりも短い配列でゲノム編集効率を低下させず、かつウイルスベクター技術を利用できる Cas9 として注目を集めています。

（Ran FA et al. In vivo genome editing using Staphylococcus aureus Cas9. Nature. 2015.）

仕様・構成内容

品名	saCas9 Protein	High Concentration saCas9 Protein
濃度	1000 nM	10 µM
容量	50 pmol (50 μL)	250 pmol (25 μL)
構成内容	saCas9 Nuclease Protein　50 μL 10X Cas9 Reaction Buffer　1.25 mL	saCas9 Nuclease Protein　25 μL 10X Cas9 Reaction Buffer　1.25 mL
その他仕様	保存バッファー 10 mM Tris-HCl (pH 7.4), 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 300 mM NaCl, 50% (v/v) Glycerol. 10X Cas9 Reaction Buffer 200 mM HEPES, 50 mM MgCl₂, 1 M NaCl, 1 mM EDTA, pH 6.5 タンパク質由来 Recombinant E. coli.

saCas9 Protein

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
saCas9 Nuclease Protein, Staphylococcus aureus	APB	K044	50 UL [6.5 μg (50pmol)]	￥11,000
saCas9 Nuclease NLS Protein, Staphylococcus aureus	APB	K045	50 PMOL [50 μl, 1000 nM]	販売終了
saCas9 Null Mutant Protein, Staphylococcus aureus	APB	K046	50 UL [6.5 μg (50pmol)]	お問い合わせ
saCas9 Null Mutant NLS Protein, Staphylococcus aureus	APB	K047	50 UL [6.5 μg (50pmol)]	お問い合わせ

High Concentration saCas9 Protein

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
saCas9 Nuclease Protein, High Concentration, Staphylococcus aureus	APB	K144	250 PMOL [25 μl]	APB社 K144 25 を参照
saCas9 Nuclease NLS Protein, High Concentration, Staphylococcus aureus	APB	K145	250 PMOL [25 μl, 10 μM, 1.30 mg/ml]	販売終了
saCas9 Null Mutant Protein, High Concentration, Staphylococcus aureus	APB	K146	250 PMOL [25 μl, 10 μM]	APB社 K146 25 を参照
saCas9 Null Mutant NLS Protein, High Concentration, Staphylococcus aureus	APB	K147	250 PMOL [25 μl, 10 μM]	APB社 K147 25 を参照