記事ID ： 14076

vWF73 FRETペプチド基質を用いて酵素活性を蛍光測定 SensoLyte® 520 ADAMTS13 Activity Assay Kit Fluorimetric

メーカー名：Anaspec, Inc.

ADAMTS13 活性を蛍光により検出するキットです。
ADAMTS13 は、血栓性血小板減少性紫斑病（thrombotic thrombocytopenic purpura；TTP）に関与するとされるメタロプロテイナーゼの一種で、アテローム性動脈硬化症、血管形成および肝硬変にも関連しています。

背景

ADAMTS13とは？

ADAMTS13（A Disintegrin-like and Metalloprotease with Thrombospondin type-1 motifs 13）とは、主に肝細胞で合成されて血中に分泌されるメタロプロテアーゼです。ADAMTS13は、フォン·ヴィレブランド因子（von Willebrand factor；vWF）中の Tyr1605-Met1606 ペプチド結合部位を特異的に切断します。vWF因子は、血小板の接着および凝集を媒介する多量体糖タンパク質です。血漿 ADAMTS13の活性が低下すると、細動脈および毛細血管でVWF-血小板を多く含む血栓の形成を特徴とする血栓性血小板減少性紫斑病（TTP）を引き起こすことがあります。したがって、血漿中のADAMTS13活性の測定は、 TTPの診断のサポートに用いられます。

使用目的

SensoLyte® 520 ADAMTS13アッセイキットは、消光性の vWF73 FRETペプチド基質を用いて酵素活性を測定します。vWF73 FRETペプチド基質には、新規の5-FAM / QXL® 520 FRETのペアが導入されています。ADAMTS13によってこのFRET基質が別々の断片に切断されることで、5-FAM蛍光（Ex/Em= 490/520 nm）が生じます。5-FAMの長波長蛍光は、生体サンプル中の自己蛍光干渉を最小限に抑えます。

特長

長波長検出(Ex/Em=490/520 nm)-自己蛍光干渉は最小限-
高感度なFRETベースアッセイ
迅速アッセイ（約1時間）
混合して波長を測定するだけの均質なフォーマット
生体サンプル（血漿）で試験済み→ 図2参照

使用例

図1 連続希釈したリコンビナントADAMTS13を用いたアッセイ感度試験。
5-FAM / QXL® 520のFRET基質を酵素とインキュベートし、60分後に蛍光を測定した（FlexStation 384II 、 Molecular Devices社）。本試験で、10 ng/mL の活性ADAMTS13を測定可能であることがわかった。

図2 ヒト血漿サンプル中のADAMTS13活性の測定。
ヒト血漿および不活性化ヒト血漿をそれぞれ、ADAMST13阻害剤（1,10-フェナントロリン）またはリコンビナントADAMTS13でスパイクした。サンプルは、37℃で1時間インキュベートし、蛍光（Ex/Em=490/520nm）を測定した (FlexStation 384II, Molecular Devices)。

参考文献

Shelat, SG. et al. Semin Thromb Hemost. 31, 659 (2005).
Crawley, J. et al. Blood 118, 3212 (2011).
Sadler, JE. Blood 112, 11 (2008).
Lee, M. et al. Blood 122, 2306 (2013).
Anil, K. et al. J Exp Med. 205, 2065 (2008).
Gandhi, C. et al. Blood. 119, 2385 (2012).
Uemura, M. et al. Thromb Haemost. 99, 1019 (2008).
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Koichi, K. et al. Brit. J Haemat 129 (2005).

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