商品情報

記事ID : 17660
研究用

翻訳後修飾の解析にSignal-Seeker™ SUMO化タンパク質濃縮キット

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Signal-Seeker™ SUMO化タンパク質濃縮キットは、アフィニティービーズを用いて、細胞/組織ライセートからSUMO化されたタンパク質を免疫沈降により濃縮できるキットです。

SUMO化タンパク質を濃縮した後、目的のタンパク質を認識する一次抗体を用いて、ウェスタンブロットにより解析します(ウェスタンブロットに使用する抗体はキットに含まれません)。

使用目的

  • 一過性の調節メカニズムの研究
  • シグナル伝達経路に関わる複数のタンパク質の測定
  • 目的タンパク質の新しい修飾の発見
  • 調節メカニズムの解析
  • シグナル伝達に関わる、内在性 または 一過性に発現するタンパク質の測定

構成内容

キットには30反応分の試薬が含まれています。

  • BLASTR™ 溶解バッファー
  • BLASTR™ 希釈バッファー
  • BLASTR™ 洗浄バッファー
  • 脱ユビキチン化/脱SUMO化阻害剤
  • プロテアーゼ阻害剤カクテル
  • SUMO-2/3 アフィニティビーズ 1
  • IP コントロールビーズ
  • HRP標識 抗 SUMO-2/3 抗体
  • Precision Red™ Advanced Protein Assay 試薬
  • ビーズ溶出バッファー
  • DMSO
  • 化学発光検出試薬A
  • 化学発光検出試薬B
  • スピンカラム
  • スピンカラムコレクションチューブ
  • BLASTR™ フィルター

その他 必要な試薬・機器

  • 目的の培養細胞/組織
  • PBS, pH 7.4(10 mM phosphate buffer pH 7.4, 140 mM NaCl, 3 mM KCl)
  • セルスクレーパー
  • 液体窒素(細胞ライセートの凍結用)
  • SDS-PAGE 用電気泳動装置・バッファー
  • ウェスタンブロット用転写装置・バッファー
  • 目的のタンパク質を認識する一次抗体
  • HRP標識 二次抗体
  • 2-メルカプトエタノール
  • 化学発光測定装置

アッセイ原理

アッセイフロー

図1 アッセイフロー

製品データ

Signal Seeker™ SUMO化タンパク質濃縮キットを用いた免疫沈降Signal Seeker™ SUMO化タンパク質濃縮キットを用いた免疫沈降

図2 Signal Seeker™ SUMO化タンパク質濃縮キットを用いた免疫沈降
以前に報告された方法に従い、HeLa細胞("HS43":42℃で10分間ヒートショック処理、"CT37":未処理)および HeLa siRNA SUMO ノックダウン("KDS2")から、変性条件で細胞ライセートを調製した1。SUMO-2/3 コンジュゲートの免疫沈降には、1mg のライセートを用いた。免疫沈降(IP)は、プロトコールに従い行った。免疫沈降したタンパク質のウェスタンブロットには、(A) 抗 SUMO-2/3 抗体(品番: ASM23)、(B) 抗 Ubc9 抗体を使用した。ヒートショック処理した細胞の SUMO-2/3 コンジュゲートの量はコントロールと比較して増加しており、shRNA SUMO-2 ノックダウンでは低下していた。
(B) 未結合の Ubc9 は 18kDa 付近に観察される。高分子量のバンドは、Ubc9 に1分子の SUMO-2/3 タンパク質が結合していることを示す。Ubc9 は、SUMO化の標的であることが報告されている1,2

参考文献

  1. Barysch S. et al. 2014. Identification and analysis of endogenous SUMO1 and SUMO2/3 targets in mammalian cells and tissues using monoclonal antibodies. Nat Protoc. 9(4):896-909
  2. Becker J. et al. 2013. Detecting endogenous SUMO targets in mammalian cells and tissues. Nature Struc. & Mol. Biol. 20, 525-531.

Signal-Seeker™ SUMO化タンパク質濃縮キット

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格

Signal-SeekerTM SUMOylation Enrichment Kit詳細データ

CYT

BK162

30 ASSAY
¥139,000

Signal-SeekerTM SUMOylation Enrichment Kit 詳細データ

CYT

BK162-S

10 ASSAY
¥55,000

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商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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