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記事ID : 16750
研究用

E1-E2-E3酵素用活性ベースプローブUbiQ Probes - Triple E probes™

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UBQ社の革新的な活性ベースの E1-E2-E3 プローブは、タンパク質ユビキチン化に関連する酵素、薬物ターゲットのバリデート、結晶化を可能にします。プローブは E1-E2-E3 カスケードによるネイティブな過程で処理されます。

また、活性部位システイン残基に不可逆的に反応し、ユビキチン化カスケード中の酵素をトラップします。

Triple E probes™

図1 メカニズム
Triple E プローブは C末端にデヒドロアラニン(Dha)グループを持ち、生理的 pH では単独で存在し、不活性状態です。しかし E1 酵素により活性化されると、求電子性になります。プローブが E1-E2-E3 カスケードによるネイティブな過程で処理されると、Dha グループは活性部位システイン残基に不可逆的に反応することができ、そのため E1、E2、E3 酵素をトラップすることができます。

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用途

  • ゲルベース活性タンパク質プロファイリング
  • セルベースアッセイ
  • 構造生物学
  • プロテオミクス

製品データ

細胞抽出物の活性型タンパク質プロファイリング

細胞抽出物の活性型タンパク質プロファイリング

図2 各サンプルに Cy5-Triple E プローブ および ATP を加え、インキュベートした In-gel 蛍光画像
A) E1 (Uba1)、E2 (Ube2L3)、E3 (ITCH) の混合液
B) 腫瘍細胞株のパネル

 

セルベースアッセイ

GFP-UBE1 を異所的に発現させた HeLa 細胞、未発現 HeLa 細胞における Cy5-Ub-Dha(マゼンダ)の分布

図3a GFP-UBE1 を異所的に発現させた HeLa 細胞、未発現 HeLa 細胞における Cy5-Ub-Dha(マゼンダ)の分布

Cy5-Ub-Dha(マゼンダ)を持つ HeLa 細胞中の E2 活性の視覚化

図3b Cy5-Ub-Dha(マゼンダ)を持つ HeLa 細胞中の E2 活性の視覚化
GFP-UbE2J1 = 緑、緑 + マゼンダ = 白、PYR-41 = Uba1 阻害剤

 

構造生物学

Ub-Dha-UBE2D3 結合の構造解析

図4 Ub-Dha-UBE2D3 結合の構造解析

 

プロテオミクス

HeLa 細胞中の Ub ライゲーションのプロテオーム広域活性プロファイリング

図5 HeLa 細胞中の Ub ライゲーションのプロテオーム広域活性プロファイリング

FAQ

【01】 プローブは E1-E2-E3 酵素のうち、どの酵素をターゲットにしているの?

プローブは E1-E2-E3 いずれの酵素も活性部位システインをターゲットにしています。

【02】 Triple E プローブの直接的なターゲットにならない、システイン触媒部位が欠如している RING クラス E3 酵素についてはどうしたらよいですか?

高安定性の E2-Ub (I)-Dha チオエーテル付加物が RING 型 E3 リガーゼの競合阻害剤として働きます。その為、RING クラス E3 酵素研究に有用です。

【03】 プローブは E1-E2-E3 酵素の基質へ転移しますか?

UBQ社が把握している限りでは、Triple E プローブは基質へ転移しません。

【04】 標識プローブはどれくらいの特異性を持っていますか?

ユビキチン化カスケード酵素に対して高い特異性を持ちます。ユビキチン(ユビキチン様)基質部位が E1 触媒アデニル化ステップにより活性化するためです。

【05】 プローブは細胞溶解液や生細胞で使用できますか?

はい、使えます。図2、図3a、図3b をご覧ください。

【06】 プローブはネイティブな方法で処理されますか?

はい、図1をご覧ください。

【07】 プローブに他の基質もしくはタグを付けることはできますか?

はい。他の基質はまもなく販売予定です。また既にカスタムオーダーも承っております。

参考文献

  1. A cascading activity-based probe sequentially targets E1–E2–E3 ubiquitin enzymes
    Nat Chem Biol. 2016 May 16. doi: 10.1038/nchembio.2084.

Triple E probes™

各種 Triple E probes™
品名 品番 タグ 基質 求電子剤
Ub-Dha UbiQ-101 - Ub Dha
Biotin-Ahx-Ub-Dha UbiQ-102 Biotin Ub Dha
His6-Ahx-Ahx-Ub-Dha UbiQ-103 His6 Ub Dha
Cy5-Ub-Dha UbiQ-104 Cy5 Ub Dha
5-carboxyRh110-Ub-Dha UbiQ-131 5-carboxyRh110 Ub Dha
Nedd8-Dha UbiQ-105 - Nedd8 Dha
Biotin-Ahx-Nedd8-Dha UbiQ-106 Biotin Nedd8 Dha
5-carboxyRh110-Nedd8-Dha UbiQ-122 5-carboxyRh110 Nedd8 Dha
品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格

Ub-Dha詳細データ

UBQ

UBIQ-101

50 UG
¥60,000

Biotin-Ahx-Ub-Dha詳細データ

UBQ

UBIQ-102

50 UG
¥72,000

His6-Ahx-Ahx-Ub-Dha詳細データ

UBQ

UBIQ-103

50 UG
¥72,000

Cy5-Ub-Dha詳細データ

UBQ

UBIQ-104

50 UG
¥84,000

5-carboxyRh110-Ub-Dha詳細データ

UBQ

UBIQ-131

50 UG
¥84,000

Nedd8-Dha詳細データ

UBQ

UBIQ-105

50 UG
¥72,000

Biotin-Ahx-Nedd8-Dha詳細データ

UBQ

UBIQ-106

50 UG
¥84,000

5-carboxyRh110-Nedd8-Dha詳細データ

UBQ

UBIQ-122

50 UG
¥84,000

 UbiQ社について

UbiQ社のメーカー情報・製品およびサービス一覧はこちらをご参照ください。
  「UbiQ社 ユビキチン研究用試薬・受託サービス一覧

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