尿サンプルから Cell-Free Circulating RNA を精製・濃縮 尿用 循環セルフリー RNA 精製キット

尿サンプル（フレッシュ／保存／凍結のいずれも可）から、PCR阻害物質を含まない高品質な循環セルフリー RNA（エクソソームRNA、ウイルスRNAを含む）を精製・濃縮できるキットです。

精製した尿中RNAは、PCR、qPCR、メチル化感受性逆転写qPCR（methylation-sensitive reverse transcription qPCR）、RT-PCR、ノーザンブロット法、RNase プロテクションアッセイ、プライマー伸長法、発現アレイ、次世代シーケンシング（NGS）などにご使用いただけます。

ご使用になる尿サンプル量に対応した、

• Mini キット（250 µL - 2 mL）
• Midi キット（2 mL - 10 mL）
• Maxi キット（10 mL - 30 mL）

をご用意しております。

尿中の循環セルフリー RNA（cf-RNA）

尿中の循環セルフリー RNA（cf-RNA： cell-free circulating RNA）（エクソソームRNAを含む）には、数種類の癌の早期発見に役立つバイオマーカーの発見や疾患状態のモニター、ならびに感染性病原体の検出に有用な情報が含まれることが、近年報告されています。

エクソソームは、唾液、血液、尿、羊水、悪性腹水などの体液中に存在し、体内の離れた細胞や組織に情報を伝達するメッセンジャーとしての役割を担っていることが多くの論文で報告されています。また、感染性病原体や腫瘍に対する獲得免疫、組織修復、神経伝達、病原体タンパク質の移動などを仲介する機能的な役割を果たしている可能性があります。
このような理由から、エクソソーム由来のRNAは、癌などの様々な疾患のバイオマーカーとして有用であると考えられます。

癌バイオマーカーのソースとして尿を使用する利点は、非侵襲性でありながら大量に採取できることです。また、同一の人物から繰り返しサンプルを採取することが可能であることから、長期的な研究が容易です。
癌バイオマーカーの探索に、血液や組織サンプル、その他の体液ではなく、尿の核酸を用いる利点として、（1）尿を介してHIVに感染する可能性はなく、その他の多くの病原体に感染する可能性も低い、（2）尿の核酸の特性は血漿や血清と同様である、（3）尿はタンパク質濃度が低く（血液の1000倍低い）、核酸の精製が技術的に容易である、などが挙げられます。

• 全てのサイズの循環RNA（circulating RNA）、エクソソーム由来の RNA（exosomal RNA）、miRNA（microRNA）を分離
• 様々な量の尿サンプルに対応
  （Mini キット： 250 µL - 2 mL、Midi キット： 2 mL - 10 mL、Maxi キット： 10 mL - 30 mL）
• フェノール抽出不要
• キャリアRNA不要
• 循環RNA・エクソソームRNAを使用目的に応じた溶出量に濃縮（50 µL - 100 µL）
• 短時間で高品質なRNAを精製
  （Mini キット： 25 - 30分、Midi キット／Maxi キット： 40 - 45分）

精製したRNAは、様々な分子生物学実験にご使用いただけます。

• RT-qPCR（Reverse transcription qPCR）
• RT-PCR（Reverse transcription PCR）
• ノーザンブロット
• RNase プロテクションアッセイ および プライマー伸長法
• 発現アレイ
• miRNA アレイ
• RNA-Seq（RNAシーケンシング）
• Nanostring
• Fluidigm
• Droplet/Digital PCR

Midi キット（品番： 57000） プロトコール

Maxi キット（品番： 57100） プロトコール

Mini キット（品番： 56900）の使用例

（画像はクリックで拡大されます）

図1 異なる量の尿サンプルを用いた循環セルフリー RNA および エクソソーム由来のRNA 精製
本キットを用いて、0.5 mL、1 mL、2 mL の尿サンプルから循環セルフリーRNA（cell-free circulating RNA）およびエクソソーム由来のRNAを精製した。精製したRNA 2 μL を RT-qPCR のテンプレートとして使用し、精製したハウスキーピング遺伝子 5S rRNA 転写物（A）および miR-21（B）の増幅を評価した。5S rRNA 転写物（A）および miR-21（B）の平均Ct値は、どちらもサンプル量の増加に応じて直線的に低下した。

（画像はクリックで拡大されます）

図2 尿サンプル量の増加に対応したRNA収量の直線性
本キットを用いて、0.5 mL、1 mL、2 mL の尿サンプルから循環セルフリーRNA（Cell-Free Circulating RNA）を精製した。精製したRNA 2 μL を RT-qPCR のテンプレートとして使用し、異なる量の尿から精製したハウスキーピング遺伝子 5S rRNA 転写物（A）および miR-21（B）量の直線性を評価した。
0.5 mL の尿中に存在する 5S rRNA 転写物の量に対して、1 mL の尿からの回収率は 96% であった。また、1 mL の尿中に存在する 5S rRNA 転写物の量に対して、2 mL の尿からの回収率は 96% であった。
miR-21 については、0.5 mL の尿中に存在する miR-21 量に対して、1 mL の尿からの回収率は 92% であった。また、1 mL の尿中に存在する miR-21 量に対して、2 mL の尿からの回収率は 100% であった。

（画像はクリックで拡大されます）

図3 尿中循環セルフリー RNA に含まれる阻害物質量の測定
本キットを用いて、0.5 mL、1 mL、2 mL の尿からRNAを単離した。溶出量を増やした（2、4、8 μL）RNAを用いて、反応容量 20 μL で qPCR を行い、Ct値の変動を検討した。テンプレート量の増加に伴いCt値が上昇する場合は、サンプル中にPCR阻害物質が存在する可能性がある。溶出量を増やしたRNAを qPCR のテンプレートに用いてもCt値への影響は見られず、テンプレート量の増加に伴いCt値が低下する傾向にあることから、本キットで精製したRNAは尿中に存在する一般的な阻害物質を含まないことが示される。

Midi キット（品番： 57000）の使用例

Midi キットの使用例を開く

Maxi キット（品番： 57100）の使用例

Maxi キットの使用例を開く

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