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IgG 糖タンパク質の解析に LudgerTag™ V-tag 糖ペプチド標識 & 濃縮キット

メーカー名：Ludger Ltd.

LudgerTag™ V-tag 糖ペプチド標識&濃縮キットは、糖ペプチドを蛍光標識および濃縮できるキットです。

本キットには、糖ペプチドのアミンに V-tag 色素（品番： LT-VTAG-01）を結合するための試薬と、標識した糖ペプチドの精製および濃縮に必要な専用の固相抽出（SPE： Solid phase extraction）カートリッジが含まれています。
Ludger V-Tagシステムは、モノクローナル抗体（mAb）のような治療用糖タンパク質の消化から生じる糖ペプチドの分析用に設計されています。このシステムは2つのステップで構成され、2時間で完了します（下記のワークフロー参照）。最初のステップでは、2-アミノ-1-ナフタレンスルホン酸から合成された新しい蛍光色素を用いて、プロテアーゼ消化物中のペプチドと糖ペプチドを標識します。第二段階は、親水性相互作用液体クロマトグラフィー（HILIC）カートリッジを用いた標識糖ペプチドの濃縮とクリーンアップです。

Ludger V-Tagシステムワークフロー

特長

色素の特性	Mass = 434.42（標識により糖ペプチドの質量が 319.33 Da 増加）蛍光　λex = 250 nm、λem = 360 nm
標識可能なサンプル数	24サンプルの標識が可能
必要なサンプル量	1サンプルあたり約 1 μg - 50 μg の糖ペプチド
適したサンプル	１つのサブクラスの IgG 糖タンパク質。その他の糖タンパク質もご使用いただけますが、糖鎖付加部位が複数ある場合は、HILIC 分析の前に、糖ペプチドを C18 HPLC により分離する必要がある場合があります。V-tag 標識を干渉する恐れがあるため、アミン系の緩衝溶液（例： Tris バッファー）や、還元剤／アルキル化剤を含まないサンプルを使用することを推奨します。アミンを含む緩衝溶液、還元剤／アルキル化剤、低分子量化合物などは、脱塩およびバッファー交換用の装置を用いて除去できます。
標識率	各 IgG 糖ペプチドのN末端に1つの V-tag 標識

構成内容

Velocity Ludger Tag 色素（品番： LT-VTAG-01）
TFA 10％（品番： LC-TFA-10PC-01 ）
LudgerClean™-A カートリッジ（品番： LC-A-24）
pH 7.2 PBS バッファータブレット（品番： LT-PBS-TAB-0.01M ）

プロトコール概略

前処理	糖タンパク質の酵素消化プロテアーゼ（Promega社　Trypsin Gold (品番： V5280) または同等品）でタンパク質を消化し、ペプチドと糖ペプチドを生成します。
I	消化した糖タンパク質に V-tag 色素を添加各サンプルに標識溶液を添加します。
II	インキュベートサンプルをインキュベートし、標識反応を進行させます。
III	標識後のクリーンアップおよび濃縮標識後、キット付属の LC-A カートリッジを用いて、過剰な V-tag 色素の除去と糖タンパク質の濃縮をシングルステップで行います。
IV	標識した糖タンパク質の保存および解析標識した糖タンパク質はすぐに解析することができます。また、凍結保存も可能です。