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概要
AimPlex® は、細胞培養上清、血清、血漿、体液、細胞／組織ライセートサンプル中の複数のターゲットタンパク質（サイトカインなど）をフローサイトメーターを使用して同時定量できる、ビーズベースのサイトカイン定量キットです。
研究ターゲットごとに測定項目を組み合わせたプレミックスタイプの「AimPlex® Premixed Multiplex キット」と、グループごとにアナライトを組み合わせ可能な「AimPlex® Single Plex カスタムパネルキット」からお選びいただけます。
特長
サンドイッチELISAと同様に、各々のビーズ群は、サンプル中のターゲットタンパク質（サイトカインなど）に特異的なキャプチャー抗体と結合しています。キャプチャーされたアナライトの量は、別のエピトープに特異的なビオチン化抗体及びストレプトアビジン-R-フィコエリトリン（PE）処理によって検出されます。R-PEの蛍光強度はサイトメーターで定量化します。サンプル中のターゲットタンパク質の濃度は、既知濃度のアナライトを段階希釈して得たスタンダードカーブと比較することで算出できます。
図1 測定原理
AimPlex® ビーズを用いたマルチアッセイ技術
サイズと蛍光強度の違いによって複数のビーズを識別します
マルチアッセイの技術は、サイズと蛍光強度の違いによって識別される複数のビーズ群を利用しています。2 種類の サイズ（4 µm と 5 µm）、それぞれのサイズで 12 段階の異なる蛍光強度のビーズを使用し、一度の反応で最大 24 アナライトまで測定することができます。反応におけるビーズ群は、488 nm レーザーのフローサイトメトリーで測定します。ビーズを分類する最大蛍光波長は 700 nm です。目的タンパク質の定量は PE を検出することで測定します。
図2 AimPlex® ビーズを用いたマルチアッセイ技術
プロトコール
図3 プロトコール
| サンプルタイプ | 細胞培養上清、血清、血漿、体液、細胞／組織ライセート
お客様のサンプルタイプごとに、「サンプル希釈試薬」をご用意しています。AimPlex® キットをご使用の際に必要です。
|
|---|---|
| 感度（LOD） | ＜10pg/mL |
| 定量下限（LLOQ） | ＜20pg/mL |
| 定量上限（ULOQ） | ＞5,000pg/mL |
| スタンダードの回収率 | 70-130％ |
| アッセイ内のCV値 | ＜10％ |
| アッセイ間のCV値 | ＜20％ |
| サンプル量 | 15μL |
※感度等の仕様はアナライトにより異なります。お問い合わせください。
AimPlex® Premixed Multiplex キット
研究ターゲットごとに測定項目を組み合わせた、プレミックスタイプの楽ちんキットです。
AimPlex® Single Plex カスタムパネル キット
ターゲットタンパク質ごとに組み合わせ可能で、3種類以上のターゲットタンパク質からプレミックスタイプでお届けします
図4 スタンダードカーブ
| Analytes | LOD (pg/mL) | LLOQ (pg/mL) | Analytes | LOD (pg/mL) | LLOQ (pg/mL) |
|---|---|---|---|---|---|
| Human IFNg | <3 | <10 | Mouse IFNg | <0.5 | <2 |
| Human IL-2 | <3 | <10 | Mouse IL-2 | <2 | <5 |
| Human IL-4 | <1 | <3 | Mouse IL-4 | <0.5 | <2 |
| Human IL-6 | <5 | <10 | Mouse IL-6 | <3 | <10 |
| Human IL-10 | <2 | <5 | Mouse IL-10 | <2 | <5 |
| Human IL-17A | <3 | <10 | Mouse IL-17A | <1.5 | <5 |
| Human TNFa | <1 | <2 | Mouse TNFa | <0.5 | <2 |
図5 マウスサイトカインスタンダード
図6 PMA+イオノマイシン（P+I）、抗CD3（ｃｄ3）、LPSで処理したヒト末梢血単核細胞の細胞培養上清サンプルをAimPlex Th1/Th2/Th17 7-Plex キットで測定した。
商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。
※ 表示価格について
- 「AimPlex®」は、下記のカテゴリーに属しています。
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