FAQ : バイオロジカルインダストリーズ（BLG）社 NutriStem® hPSC XF 培地について

多能性幹細胞の培養をサポートする、コーティング済みのフラスコ、ディッシュ、マルチウェルプレートが必要です。
コーティングには2つのカテゴリがございます。一つが、タンパク質ベースとした方法で、通常は、ECMを使用します。もう一つの方法としては、フィーダー細胞をベースとした培養です。通常、ヒトまたは、マウスの線維芽細胞を使用します。

Biological Industries 社の経験では、Growth Factor Reduced マトリゲルを使用した際に引き起こされるものです。Growth Factor Reduced マトリゲル上では培養が難しいので、通常のマトリゲルもしくはヒトES細胞用マトリゲルをご使用ください。

NutriStem® は完全培地のため、サプリメントの追加は必要ございません。
この培地には、細胞の分化を防ぎ、多能性を維持する少量のタンパク質と成長因子が含まれます。

以下の利点が上げられます。

• 血清内の未知の成分の影響を排除します。
• 既知の成分を必要とする医療用アプリケーションについて、直接または、間接的にサポートします。
• 伝染病による健康リスクを排除します。
• Lot間差が少ない。

加える必要はございません。NutriStem® hPSC XFは、TGF-βとbFGFを含みます。

無菌作業および無菌の培養環境を維持する用途には、本培地は推奨されません。

培養条件や細胞の起源によりますが、50継代以上未分化状態を維持できます。

誘導プロトコルに従って、細胞を播種する必要がございます。

下記のグラフがヒトES細胞H1株をNutriStem® hPSC XF培地と他社培地で培養したときの比較データです。 96 ウェルプレートに継代数6 のH1 細胞を播種し、24 時間ごとに培地交換を行い細胞数を測定しました。他社培地に比べてNutriStem® hPSC XF培地の方が良好に細胞が生育している事が確認できました。

15％を超える分化を示さない場合、またはコロニーが成長して互いに接触しない場合でも、フィーダー細胞が培養されるため、フィーダー依存の培養は、継代培養から1週間後に新しいコーティングプレートに再播種する必要があります。 フィーダー細胞は古くなり、多能性コロニーの支持が低下します。

継代後、48時間以内の培地交換は行わないでください。

多能性細胞は、未分化の外観を持っている必要がございます。分化率が15％を超える場合、均一な培養ではございません。そのため、分化細胞を示すコロニーがある場合は、コロニーを手動で除去する必要があります。

分化が開始する理由として、培養中の環境(温度、CO2濃度、pHの変化)、継代数、培地交換など、いくつかの物理的、生化学的な理由があります。
物理的、生化学的な理由のため、同じ細胞、同じ培養条件でも、分化率が異なる場合がございます。

推奨の凍結保存培地は、NutriFreez® D10 Cryopreservation Mediumです。この凍結保存培地は、ヒトiPS細胞、ES細胞で試験を行っております。また、動物由来成分フリー (ACF) の凍結保存培地で、DMSOとメチルセルロースを含みます。
この凍結保存培地で保存した多能性細胞は、解凍後、非常に良好な回復を示します。

1 mlの凍結バイアルに、6ウェルプレート1ウェルに継代した細胞を保存してください。

液体窒素 (液相または気相) での保存を行っている限り、期間の制限はございません。

血清を加える必要はござません。NutriFreez® D10 Cryopreservation Mediumをご使用ください。

NutriStem® hPSC XF培地は凍結保存（-20°C）されています。 培地は2〜8℃または室温で解凍し、適切な量に分注し、再凍結する必要があります。 無菌状態で分注されている限り、培地の有効期限はボトルに記載されているとおりです。
解凍した培地は、暗所で2〜8°Cで最大2週間保存できます。

培地は2回解凍することができます。最初の解凍は元のボトルを分注するとき、2回目は培地で作業するときに解凍します。

NutriStem® hPSC XF培地には沈降を引き起こす成分が含まれていないため、使用しないでください。

部分的に解凍した培地を再凍結することは推奨しません。部分的に解凍した培地は、再凍結する前に完全に解凍し、穏やかに混合して再度凍結する必要があります。

ほとんどの系統では適応を必要とせず、NutriStem® hPSC XF培地に細胞を直接播種するだけです。
一部の系統では、最初の数回の継代で徐々に適応させるか、bFGFの濃度を上げる必要があります。

NutriStem® hPSC XF培地には、pH指示薬であるフェノールレッドが含まれています。 酸性化の場合、培地の色が黄色に変わります。 アルカリ物質にさらされると、培地の色が紫色に変わります。 いずれの場合も培地は使用しないでください。