【商品詳細】
いいえ、損傷しまたは破壊されたDNA は、損傷した DNA による 8.8 kb の PCR 産物が生成されないことにより、損傷のない DNA と区別できます（この方法の原理については以下を参照）。
ステップ1.DNA損傷の判定
RT-PCR mtDNA 損傷分析キットは、8.8 kb または 8.2 kb 断片の複製に QPCR プライマー ミックスを使用して長い (ヒトでは 8.8 kb、ラットおよびマウスでは 8.2 kb) mtDNA を複製することにより、ミトコンドリア DNA 損傷のレベルを測定します。 DNAに損傷があると、PCRができません。したがって、長い QPCR 産物の形成が多いほど、DNA 損傷が少ないことを表します。より低い QPCR 産物は、付加体形成または切断によるより高い DNA 損傷を表します。
ステップ2.8.8kb又は8,2kbのQPCR産物の定量
ステップ 1 で生成された 8.8 kb または 8.2 kb の PCR 産物のリアルタイム PCR は、リアルタイム PCR プライマー ミックスを使用して実行され、RT-PCR 産物は、8.8 kb または 8.2 kb の mtDNA を使用して得られた標準曲線を使用して計算されます。
したがって、8.8 kb または 8.2 kb の mtDNA 複製 (ステップ 1) は、実験サンプルの DNA 損傷レベルをコントロールと区別します。次に、RT-PCR (ステップ 2) で QPCR 産物を複製し、実験サンプルの DNA 損傷レベルをコントロールと比較します。
はい。 mtDNA 損傷キット (品番：DD2H、DD2R、DD2M) では、8.8 kb または 8.2 kb の PCR (long QPCR) を実行することによって mtDNA 損傷を測定し、QPCR 産物のレベルを、損傷のないコントロール mtDNA のレベルと比較します (ステップ 1)。ステップ 2 の 8.8 kb または 8.2 kb QPCR 産物の定量は、短いフラグメント (約 200 bp) を複製するリアルタイム PCR によって実行されます。
短い(200bp未満)DNAがRT-PCRによって複製される可能性は、8.8kbまたは8.2kb(8800bpまたは8200bp)のDNAの塩基上の損傷と比較して非常に低いです(ほとんど何もない)。Long QPCRは、8.8kbまたは8.2kb領域の塩基が付加物を有するかまたは切断されている(8800又は8200のうちの1つ)場合でも成功しません。DNAが損傷すると、サンプル中のミトコンドリアには、8.8 kb または 8.2 kb の DNA 領域が損傷しているものと、または損傷していないものを有します (2 種類の混合物)。 RT-PCR は、傷害による損傷を受けていない 8.8 kb または 8.2 kb の断片の QPCR 産物を定量化するために行われ、損傷のレベルが高いほど、8.8 kb または 8.2 kb の低い QPCR 産物が生成されます。
mtDNA のコピー数測定（製品番号 MCN1、MCN2、または MCN3）では、短い（〜200 bp）mtDNA と短い（〜200 bp）β-アクチン（核 DNA）の両方がリアルタイム PCR によって複製され、mtDNA/核 DNA の比率が得られます。 mtDNA/核 DNA の比率が高いということは、細胞内のミトコンドリアのコピー数が多いことを意味します。
