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Q&A

記事ID : 17871

FAQ : Applied StemCell(ASC)社 TARGATT™ システム について

サービス詳細:「TARGATT™ 部位特異的ノックインマウス/ラット作製受託サービス

【01】 興味のある遺伝子を過剰発現するモデルを作成できますか?

はい。TARGATT™ システムは遺伝子の過剰発現に最適です。組織特異的、ユビキタスまたは誘導性遺伝子発現のために、異なるプロモーター、例えば、組織特異的プロモーターまたは遍在性プロモーター、および誘導性システム(Tet On / Off、loxP-stop-loxP)を使用することができます。

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【02】 TARGATT™ システムを使用して、組織特異的な遺伝子発現を持つトランスジェニックマウスを作製できますか?

はい。TARGATT™ システムを使用して、組織特異的トランスジェニックマウスモデルを作製することができます。導入遺伝子の発現を促進するために組織特異的プロモーターを使用するだけです。あるいは、loxP-stop-loxP カセットを、ユビキタスプロモーターと導入遺伝子の間に配置することができます。組織特異的 Cre マウスと交配すると、その特定の組織において導入遺伝子が発現されます。

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【03】 遺伝子発現を促進するために使用されるプロモーターは何ですか?

お客様よりご提供頂くか、文献に掲載された任意のプロモーターを使用することができます。

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【04】 興味ある遺伝子が組み込まれる特定の部位はどこですか?

標的遺伝子は、H11 と Rosa26 の2つのよく特徴付けられた遺伝子座のいずれかに特異的に挿入されます。 PNAS刊行物(Tasic B, et al., Site-specific integrase-mediated transgenesis in mice via pronuclear injection. Proc Natl Acad Sci USA. 2011 Apr 4)において、特定の部位に関するより詳細な情報を掲載しております。

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【05】 H11 と Rosa26 のほかに、他の遺伝子座に遺伝子を挿入することはできますか?

はい。最初に、CRISPR/Cas9 を用いてドッキング attP 部位をご希望の遺伝子座に挿入し、次に目的の遺伝子を TARGATT™ を用いて attP 部位に挿入する必要があります。

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【06】 レポーター遺伝子を組み込むことはできますか?どんな種類のレポーター遺伝子をお勧めしますか?

はい。GFP、DsRed、mCherry、LacZ、ルシフェラーゼなどの任意のレポーター遺伝子を発現させることができます。

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【07】 挿入できる遺伝子の最大サイズは? 遺伝子が大きすぎるとシステムの効率に影響はありますか?

これまでに成功した最大のDNA断片は 22kb です。挿入効率は、DNA断片サイズの増加とともに減少するようです。より大きな断片(> 10kb)は、陽性動物を得るために追加の胚注入を必要とします。

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【08】 TARGATT™ ノックインシステムの効率が高いのはなぜですか?

CREまたはFLPのような他のリコンビナーゼとは異なり、TARGATT™ インテグラーゼは、attP および attB の2つの主に無関係な部位をそれらの配列で認識し、組換えます。 attB および attP におけるインテグラーゼ媒介性インテグレーションが起こると、2つの新しいハイブリッド部位 attL および attR が接合部に形成されます。これらの新しいサイトはインテグラーゼによって認識されません。従って、インテグラーゼ反応は一方向性です。いったんDNAが統合されると、それは切除されず、統合プロセスが非常に効率的です。 TARGATT™ インテグラーゼシステムにより、遺伝子は Rosa26 または H11 遺伝子座に完全に組み込まれます。

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【09】 ゲノムに挿入される遺伝子のコピー数はいくつですか?

単一コピーです。

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