シアル酸分析は、バイオ医薬品の特性評価に関するICH Q6Bガイドラインに規定されている規制要件です。特に一部の患者は高レベルの抗Neu5Gc抗体を有し、これがNeuGc含有バイオ医薬品の中和や除去をもたらし得るため（Nguyen et al. 2005）、ヒト型（Neu5Ac）および非ヒト型（Neu5Gc）シアル酸の相対レベルの決定は非常に重要です。糖タンパク質を分析する際のNeu5Ac及びNeu5Gcは、しばしばバイオ医薬品の重要品質特性（Critical Quality Attribute, CQA）と見なされています。
技術情報
背景
一般的なNeu5Ac、Neu5Gc比率を決定する方法
- 弱酸加水分解による、糖タンパク質の末端シアル酸残基の放出。
- 放出されたシアル酸のDMB（1,2-diamino-4,5-methylenoxybenzene）による蛍光ラベリング。
- HPLC、UHPLCによる相対定量分析。
LudgerTag™DMBキット（品番：LT-KDMB-A1）は、糖タンパク質からシアル酸を放出し、それらをDMB標識する為に必要なものが全て含まれています。このキットには、最大22サンプル分（50〜100 µgの糖タンパク／1サンプル）の試薬が含まれています。1サンプルあたり約10 pmol〜2.5 nmolのシアル酸が検出可能です。
キットには、シアル酸リファレンスパネル（品番：CM-SRP-01）及びNeu5Ac、Neu5Gcの定量スタンダードが含まれています。これらのスタンダードは、放出されたシアル酸サンプルと同時にDMBでラベルすることができます（図1）。定量スタンダードの段階希釈物を用いてスタンダードカーブを描くことで定量分析も可能となります。（リファレンスパネル、各定量スタンダードは単品でも販売しております。）
ポジティブコントロールには、Neu5AcとNeu5Gcを含むフェチュイン（品番：GCP-FET-50U-X4）やグリコペプチドスタンダード（品番：BQ-GPEP-A2G2S2-10U）をお勧めしています（非同梱）。グリコペプチドスタンダードは、A2G2S2グリカンを持つペプチドで、グリカンの放出、ラベリング、回収の効率を確認することができ、シアル酸測定の精度を確認できます。また、ヒトエリスロポエチン（EPO）に存在するNeu5,9Ac2の同定に使用できるスタンダード（品番：CM-NEU5,9AC2-01）もございます（非同梱）。いずれも使用バッファーをネガティブコントロールとして使用することができます。
- Nguyen DH, Tangvoranuntakul P, and Varki A. (2005) Effects of Natural Human Antibodies against a Nonhuman Sialic Acid That Metabolically Incorporates into Activated and Malignant Immune Cells. J Immunol 175:228-236.
参考文献
図1. DMB標識したシアル酸リファレンスパネルを、uR2 UHPLCカラム（品番：LS-UR2-2.1x100）を用いて分析した。
| 本キット | 品名 | メーカー | 品番 |
|---|---|---|---|
| LudgerTag™ DMB Sialic Acid Labelling Kit | LUD | LT-KDMB-A1 | |
| 関連製品 | スタンダード、ポジティブコントロール | ||
| Fetuin Glycoprotein (4 x 50 ug) | LUD | GCP-FET-50U-X4 | |
| BioQuant A2G2S2 glycopeptide standard | LUD | BQ-GPEP-A2G2S2-10U | |
| N-acetylneuraminic acid qualitative standard | LUD | CM-NEU5,9AC2-01 | |
| N-acetylneuraminic acid (Neu5Ac or NANA) quantitative standard | LUD | CM-NEU-AC-01 | |
| N-glycolylneuraminic acid (Neu5Gc or NGNA) quantitative standard | LUD | CM-NEU-GC-01 | |
| Sialic acid reference panel | LUD | CM-SRP-01 | |
| HPLC, UHPLCカラム | |||
| LudgerSep™ R1 HPLC Column | LUD | LS-R1-4.6x150 | |
| LudgerSep™ uR2 UHPLC Column | LUD | LS-UR2-2.1x100 |
商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては
使用しないように、十分ご注意ください。
