技術情報

記事ID ： 5185

プロトコールとトラブルシューティングガイド
5. アルカリフォスファターゼ酵素活性の分析

メーカー名： EY

化学的原理

オルトリン酸モノエステル + H₂O → アルコール + H₃PO₄

分析用試薬

バッファー：	0.1 M Tris buffer, pH 8.0および、1.0 M Tris buffer, pH 8.0
酵素：	0.1 M Tris bufferで希釈。使用可能希釈範囲：5-20 μg/ml
基質：	0.001 M p-nitrophenylphosphate (P-NPP) in 1.0 M Tris, pH 8.0

1.　反応用チューブとコントロール用テストチューブに、基質を2.9 mlずつ加えます。

2.　0タイムは、反応用チューブに希釈済み酵素を100 µl、もしくはコントロール用チューブにTrisを100 µl添加した時です。その後、しっかりと混合します。

3.　15秒ごとに3分間、OD 410を測定し記録するか、5.0 M NaOHを100 µl添加して反応を停止させ、3分後に終点を読みとります。

4.　OD 410の測定値は、1分間当たりの吸光度の変化率を決定するために用います。

活性1unitは、25°Cで1分間に1 µmolのP-NPPを分解する酵素量とします。P-NPPのモル吸光係数は、1.62 x 10⁴ cm^-1です。