セルバイオラボ社 アデノウイルスによる遺伝子デリバリー プロトコール内で使用した商品
技術情報
セルバイオラボ社 アデノウイルスによる遺伝子デリバリー
使用するキットおよび試薬
● QuickTiter™ Adenovirus Titer Immunoassay Kit(品番:VPK-109)
【構成内容】
1.Anti-Hexon Antibody
2.Secondary Antibody, HRP Conjugate
3.DAB Substrate
4.Diluent (10X)
5.Ad-β gal Positive Control
<< キットに含まれないもの>>
1.Recombinant adenovirus of interest
2.HEK 293 cells and cell culture growth medium
3.Methanol
4.1% BSA/PBS
5.H2O2
6.Light Microscope
7.(optional) β-Galactosidase Staining Kit (Cat.# AKR-100)
プロトコール
ご希望のウイルスを準備します。
免疫染色
1. プレートを傾け,プレートの縁から培地をアスピレートします。
0.5mLの冷メタノールをゆっくりと加え,感染させた293細胞を固定します。
-20℃で20分インキュベートします。
2. 固定した細胞を3回1xPBS,5分間洗浄します。
3. 1% BSA in PBS で室温で1時間ブロックします。(orbital shaker をご使用ください)
4. 0.25 mL のHexon 抗体をそれぞれのウェルに加え,室温で1時間インキュベートします(orbital shaker をご使用ください)。
5. 固定した細胞を3回1xPBS,5分間洗浄します。
6. 0.25 mL の希釈したHRP標識した二次抗体をそれぞれのウェルに加え,室温で1時間インキュベートします(orbital shaker をご使用ください)。
7. 固定した細胞を3回1xPBS,5分間洗浄します。
8. 0.25mLの1X DAB working solution をそれぞれのウェルに加え,室温で10分間インキュベートしますorbital shaker をご使用ください)。
※インキュベーション後5分以内にアデノウイルス感染細胞は濃茶色に染色されます。
9. DABをアスピレートし,1xPBSで二回洗浄します。
10.染色された細胞をカウントします。
※ 1ウェルあたり少なくとも5つのフィールドに分けてカウントしてください。
11.染色された細胞の平均をとり,ウイルスのタイターを計算します。(infectious units/mL).