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老化、酸化ストレス研究に最適！生体内タンパク質の酸化程度を特異的に検出カルボニル化タンパク質ウェスタンブロット検出キット

メーカー名：株式会社シマ研究所

老化、酸化ストレス研究に最適な生体内タンパク質の酸化程度を特異的に検出できるキットです。

カルボニル化タンパク質ウェスタンブロット検出キットは、カルボニル化タンパク質を特異的に検出します。2,4-ジニトロフェニルヒドラジン（DNPH）を用いてカルボニル基を誘導体化し、DNP抗体で特異的にウェスタンブロットにより検出します。

この度、保存温度を見直すことで、構成品「酸化BSA」の安定性が向上いたしました。プロトコールの表現を一部変えて分かりやすくし、バージョンアップ品として販売しています。

特長

分子量の移動度の違いが起こりません。
-既存の方法ではサンプルを予めDNPHと反応させた後に泳動を行うため、期待される分子量とは全く異なる移動度でタンパク質が泳動されるなど、カルボニル化タンパク質の同定が非常に困難でしたが、本キットではこの問題を解決するため、サンプルを電気泳動後、タンパク質を膜に転写し、膜上でタンパク質のDNPH誘導体化を行うため、移動度が正確です。
操作時間を大幅に短縮できます。
-サンプルを電気泳動前に一本一本処理する必要がないため、操作が非常に簡便であり、操作時間を大幅に短縮できます。

構成内容

ウサギ抗DNPポリクローナル抗体　0.075 mL
※本キットに含まれる抗体はNaN₃を含んでおりません。
DNPH溶液： 10×2,4-Dinitrophenylhydrazine (DNPH)溶液　15 mL
酸化タンパク質：酸化BSA、SDS-PAGE用サンプルバッファーに溶解・熱還元処理済み　0.15 mL

使用例

図1．2,000倍希釈ウサギ抗DNP抗体で検出
DNPH(+)：DNPH in 2 N HClで処理　酸化BSA　0.1μg（左）、マウス肝臓抽出物　5μg（右）
DNPH(-)：2 N HClのみで処理　酸化BSA　0.1 μg（左）、マウス肝臓抽出物　5μg（右）
CBB染色：タンパク質をクマシー染色
タンパク質を膜に転写後、DNPH処理した時（DNPH(+)）のみカルボニル化タンパク質が検出された。DNPH処理しない時（DNPH(-)）にはカルボニル化タンパク質は検出されない。反応が特異的であることが分かる。
［資料提供　東京都老人総合研究所・老化制御　石神昭人先生］

参考文献

Nakamura A. et al., Analysis of protein carbonyls with 2,4-dinitrophenyl hydrazine and its antibodies by immunoblot in two-dimensional gel electrophoresis. J Biochem (Tokyo). 119 768-774 (1996)
Goto S. et al., Age-associated, oxidatively modified proteins: A critical evaluation. Age 20 81-89 (1997)
Goto S. et al., Carbonylated Proteins in Aging and Exercise: Immunoblot Approaches. Mech Ageing Dev 107 245-253 (1999)
Nakamura A. et al., Vitellogenin-6 is a major carbonylated protein in aged nematode, Caenorhabditis elegans. Biochem Biophys Res Commun. 264 580-583 (1999)
Robinson CE. et al., Determination of protein carbonyl groups by immunoblotting. Anal Biochem. 266 48-57 (1999)
Sato T. et al., Senescence marker protein-30 protects mice lungs from oxidative stress, aging, and smoking. Am J Respir Crit Care Med. 174 530-537 (2006)