記事ID ： 1863

老化、酸化ストレス、疾患研究に！生体内タンパク質の酸化程度をIHCで検出カルボニル化タンパク質免疫組織染色キット

メーカー名：株式会社シマ研究所

世界初！生体内タンパク質の酸化程度を調べる免疫組織染色キットが誕生しました。老化、酸化ストレス、疾患研究に最適です。カルボニル化タンパク質免疫組織染色キットを使用することで、組織切片上でのカルボニル化タンパク質検出が可能です。

背景

細胞や組織で発生する活性酸素種（ROS）は近くに存在するタンパク質を非特異的に酸化します。タンパク質の酸化修飾体として、よく知られているのがカルボニル化タンパク質です。カルボニル化タンパク質はタンパク質中のプロリン、アルギニン、リシン、スレオニンなどのアミノ酸がROSにより酸化修飾を受け、カルボニル誘導体となったタンパク質の総称です。カルボニル誘導体は化学的に安定なため、近年、典型的な酸化ストレスのマーカーとして頻繁に用いられています。

使用目的

本シリーズは、カルボニル化タンパク質を特異的に検出するため、2,4-ジニトロフェニルヒドラジン（DNPH）を用いてカルボニル基を誘導体化し、DNP抗体で特異的に検出する検出キットです。今まで、カルボニル化タンパク質の検出キットはウエスタンブロットのみでした。本キットは世界初、組織切片上でのカルボニル化タンパク質検出を可能にしました。
関連商品のカルボニル化タンパク質ウェスタンブロット検出キット（品番：ROIK03）との組み合わせにより、より信頼性の高い実験結果が得られます。

特長

組織切片上でのカルボニル化タンパク質検出が可能です。

構成内容

ウサギ抗DNPポリクローナル抗体　0.06 mL
※本キットに含まれる抗体はNaN₃を含んでおりません。
未染標本：マウス腎臓（Methacarn (メタカン）固定パラフィン包埋切片）　2枚
DNPH溶液：2,4-Dinitrophenylhydrazine (DNPH)溶液　6 mL

注：本キットはホルムアルデヒド、パラホルムアルデヒド、グルタルアルデヒドなどアルデヒド基を含む固定液には使用できません。固定にはMethacarn (メタカン）固定液（メタノール：クロロホルム：酢酸＝6：3：1）を推奨します。

使用例

マウス肝臓（上段）、腎臓（下段）を100倍希釈ウサギ抗DNPポリクローナル抗体で免疫染色した。
発色は、ジアミノベンチジン（3,3’-diaminobenzidine）で行った。DNPH処理しない時（DNPH(-)）にはカルボニル化タンパク質は染色されない。反応が特異的であることが分かる。

［資料提供　東京都老人総合研究所・老化制御　石神昭人先生］

参考文献

Nakamura A. et al., Analysis of protein carbonyls with 2,4-dinitrophenyl hydrazine and its antibodies by immunoblot in two-dimensional gel electrophoresis. J Biochem (Tokyo). 119 768-774 (1996)
Goto S. et al., Age-associated, oxidatively modified proteins: A critical evaluation. Age 20 81-89 (1997)
Goto S. et al., Carbonylated Proteins in Aging and Exercise: Immunoblot Approaches. Mech Ageing Dev 107 245-253 (1999)
Nakamura A. et al., Vitellogenin-6 is a major carbonylated protein in aged nematode, Caenorhabditis elegans. Biochem Biophys Res Commun. 264 580-583 (1999)
Robinson CE. Et al., Determination of protein carbonyl groups by immunoblotting. Anal Biochem. 266 48-57 (1999)
Sato T. et al., Senescence marker protein-30 protects mice lungs from oxidative stress, aging, and smoking. Am J Respir Crit Care Med. 174 530-537 (2006)