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研究用

老化細胞マーカー SA β-Gal を染色・定量細胞老化アッセイ 酸性βガラクトシダーゼ測定キット

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酸性βガラクトシダーゼ測定キットは、老化マーカーとして広く用いられている老化関連酸性β-ガラクトシダーゼ(SA β-Gal)を染色または活性測定するためのキットです。X-gal 染色または蛍光基質を用いて測定します。

本製品は、サンプルに応じて (1)ライセート用、(2)生細胞用、(3)固定細胞・組織サンプル用の3タイプがございます。(→ 酸性βガラクトシダーゼ測定キット一覧

背景

細胞の老化について

正常な初代培養細胞は、増殖停止を受けて老化表現型を獲得するまで、限られた倍化数でのみ増殖します。この有限の寿命は、培養細胞の元となった生物の年齢や生物種の平均寿命に相関します。年齢が高かったり平均寿命が短いと、細胞の倍化能力は低くなります。老化細胞は、G1期の不可逆的な増殖停止によって特徴付けられ、細胞周期の進行を促す遺伝子の抑制と細胞周期を阻害するp16INK4a、p53、およびそれらのターゲットとなる転写因子 p21CIP1 の発現上昇が関与します。また、老化細胞は、マイトジェン誘導の細胞増殖に抵抗性を持ち、細胞の巨大化と扁平化が生じるとされます。老化を促進する経路や老化を介する経路の研究は、発がん機構を理解する上できわめて重要です。正常な細胞は、制御の効かない増殖と腫瘍形成に対抗するメカニズムを持っています。

老化細胞は、老化関連酸性β-ガラクトシダーゼ(SA β-Gal;senescence associated ß-galactosidase)活性のような共通の生化学的マーカーを呈します。老化現象は培養細胞で特徴付けられた一方で、生体内でも起こっていることが証明されています。

酸性βガラクトシダーゼ測定キット一覧

  SA-β-gal 活性測定 SA-β-gal 染色
サンプル (1)細胞ライセート (2)生細胞 (3)固定細胞・組織サンプル
品名/品番 96-Well Cellular Senescence Assay
(品番:CBA-231) 
Quantitative Cellular Senescence Assay
(品番:CBA-232) 

Cellular Senescence Detection Kit (SA-β-Gal Staining)
(品番:CBA-230) 

ポイント
  • 96ウェルフォーマット
  • ハイスループット解析に最適
  • キットに含まれる細胞溶解液は、リソソームのβ-gal活性を抑制し、最適な条件で測定
  • 生細胞を解析できる
  • 細胞膜透過性のSA-β-gal基質を採用
  • 老化細胞を観察
構成内容
  • 細胞溶解液
  • 反応液
  • SA-β-Gal 基質
  • 停止液
  • 細胞前処理液
  • SA-β-Gal 基質
  • 固定溶液
  • 染色液
    (4種類:A,B,C,D)
  • X-Gal 溶液
測定 蛍光プレートリーダー
(360 nm/465 nm)
蛍光顕微鏡 もしくは
フローサイトメトリー
(485 nm/520 nm) 
光学顕微鏡
アッセイ数 96 ウェルプレートで
最大120 アッセイ
35 mm ウェルで10アッセイ 35 mm ウェルで50アッセイ

測定例

老化ヒト肺線維芽細胞HFL-1細胞におけるSA-ß-Gal 活性
図1.老化ヒト肺線維芽細胞HFL-1細胞におけるSA-ß-Gal 活性(CBA-231
正常なHFL-1 細胞を異なる継代数で溶解し、測定した。ライセートは、SA-ß-Gal基質と共に37℃で一時間インキュベートした。

よくある質問 Q&A

 

細胞内 SA βGal 染色キット(品番:CBA-230

【01】 組織サンプルに適合しますか?

はい。組織サンプルの染色に使用できます。プロトコルを改変する必要はありません。

【02】 青色が検出されないのですが・・・

この老化アッセイにおいて、青色が見られないのは、老化している細胞が少ないか、細胞が老化の前段階のステージに入っていることを示します。CBL 社では、ポジティブコントロールとして、継代数の多い細胞株(老化研究によく使用される初代ヒトフィブロブラストや WI-38 細胞)の使用をお奨めします。CBL 社の96ウェルフォーマットの SA-B-Gal 活性検出キット(品番:CBA-231)を使用するのも良いかもしれません。このアッセイは、感度が高く老化と老化の全段階の両方を検出します。

 

96 ウェル細胞内 SA βGal 活性キット(品番:CBA-231

【03】 SA-β-Gal 活性はどのように測定されるのですか?

このアッセイは、蛍光基質を用いて細胞ライセート中の SA-β-Gal 酵素活性を検出します。キットに含まれるバッファーはリソソームの β-gal 活性を抑制し、最適な条件で SA-β-Gal を測定するために、pH6.0 を維持します。

【04】 検出メカニズムは?

老化は、細胞ライセート中の SA-β-galactosidase 活性を検出することで測定されます。非蛍光基質は、SA-β-galactosidase によって加水分解されることで青色の蛍光 (Ex: 360 nm, Em: 465 nm) を発します。反応液に添加される停止液は、定刻で反応を停止している間に蛍光を最大にする構成物を含んでいます。

【06】 このアッセイはどんな細胞株にも適合しますか?

老化関連 β-ガラクトシダーゼ (SA-β-Gal) 活性は、様々な老化細胞の共通のマーカーで、このアッセイは細胞タイプに特異的なものではありません。

 

下記よりそのほかのFAQもご覧いただけます。

細胞老化アッセイ 酸性βガラクトシダーゼ測定キット

• 96-Well Cellular Senescence Assay (品番CBA-231)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
96-well Cellular Senescence Assay (SA β-Gal Activity)詳細データ CBL CBA-231 1 KIT
[120 assays]
¥99,000
96-Well Cellular Senescence Assay Kit (SA-β-gal Activity, Fluorometric Format), Trial Size詳細データ CBL CBA-231-T 24 ASSAY
¥50,000
96-well Cellular Senescence Assay (SA β-Gal Activity)詳細データ CBL CBA-231-5 5*120 ASSAY
お問い合わせ

• Quantitative Cellular Senescence Assay Kit (品番CBA-232)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Quantitative Cellular Senescence Assay詳細データ CBL CBA-232 10 ASSAY
[35 mm dishes]
¥63,000
Quantitative Cellular Senescence Assay詳細データ CBL CBA-232-5 5*10 ASSAY
¥265,000

• 細胞内SA βGal 染色キット(品番:CBA-230)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Cellular Senescence Detection Kit (SA-β-Gal Staining)詳細データ CBL CBA-230 1 KIT
[50 assays]
¥79,000
Cellular Senescence Detection Kit (SA-β-Gal Staining)詳細データ CBL CBA-230-5 5*50 ASSAY
¥335,000
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