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毒性タンパク質の発現に有用なコンピテントセルLucigen社 OverExpress™ Competent cell

メーカー名：Lucigen Corporation.

OverExpress™ コンピテントセルは、毒性タンパク質の発現に有用なコンピテントセルです。膜タンパク質、細胞質タンパク質、ヌクレアーゼは細菌での発現が困難ですが、OverExpress™ コンピテントセルでは簡単に発現することが出来ます。

4種類のOverExpress™ 株［（C41(DE3)，C43(DE3)，C41(DE3)pLysS，C43(DE3)pLys）］をケミカルコンピテントセルまたはエレクトロコンピテントセルのフォーマットでご用意致しております。

研究者が使ってみました！
アプリケーションノート

背景

ルシジェン（LUC）社のOverExpress™ コンピテントセルは、真正細菌、酵母、植物、ウイルス、哺乳類等、全生物由来の毒性タンパク質の発現が可能なユニークで新しいコンピテントセルです。膜タンパク質、細胞質タンパク質、ヌクレアーゼは細菌での発現が困難ですが、OverExpress™ コンピテントセルでは簡単に発現することが出来ます。
OverExpress™ の菌株は、表現型上遺伝子変種を含んでおり、毒タンパク質に対して耐性を示すものが選択されています。C41（DE3）株はE. coli BL21（DE3）に変異を加えることで、より毒性タンパク質に対する耐性を高めており、さらにC43（DE3）株は、C41（DE3）株の中から、高い毒性耐性を示す菌体を選別したものとなっています。

通常のBL21(DE3)細胞のように、OverExpress™は溶原菌λDE3です。これらの菌株はlacUV5プロモーターの調節下にあるT7 RNAポリメラーゼ遺伝子の染色体をコピーします。この菌株はルシジェン社のpSMARTR-cDNAベクターなどT7誘導型発現ベクターにクローニングした遺伝子のタンパク質発現に適しています。 OverExpress™ pLysS株はT7 RNAポリメラーゼのナチュラルインヒビターであるT7リゾチームをコードするクロラムフェニコール耐性プラスミドを持っています。
pLysS株は誘導の前にT7 RNAポリメラーゼの発現を抑制する少量のT7 リゾチームを生産するため、毒性を持ったリコンビナントタンパク質の安定性をさらに高めます。

カタログあります！

特長

多数の毒性をもつタンパク質や膜タンパク質の発現に成功！引用文献350報以上！
BL21(DE3)細胞は毒性を持つタンパク質では発現が困難です。特に、膜タンパク質は創薬研究や新しい診断法の開発、様々な研究分野において重要なターゲットであるにもかかわらず、毒性を持つために従来のコンピテントセルでは使用が困難でした。OverExpress™ コンピテントセルは、あらゆる毒性を持つタンパク質と同様に膜タンパク質の発現で優れた結果を示します。
組み換え遺伝子の発現成功率を著しく増加
不活性な凝集体（inclusion body）の形成を低減

製品データ

**OverExpress™ の他菌株との比較**
菌株	形質転換成功率 a	毒性を誘導した発現 b	プラスミドの発現 c
BL21(DE3)	16/26 (62%)	25/26 (96%)	14/26 (54%)
C41(DE3)	28/28 (100%)	14/28 (50%)	24/28 (86%)
C43(DE3)	28/28 (100%)	1/28 (4%)	23/28 (81%)

a.プラスミドを形質転換後、LB(アンピシリン含有）アガープレート上で選択されたコロニーの数を形質転換成功とした。
b.プラスミドを形質転換後、LB(アンピシリン含有+IPTG）アガープレート上で選択されなかったコロニーの数を毒性の発現とした
c.LB(アンピシリン含有）アガープレート上で選択されたコロニーを増殖させた後IPTGで誘導し、クマシー染色したSDS-PAGE上のトータル細胞ペレットにおけるタンパク質の量を発現したプラスミドとした。

T7プロモーターで発現させたGFPをC41, BL21，C43コンピテントセルに形質転換後、IPTGプレートに播種し、タンパク質を発現させた。

よくあるご質問　Q&A集

【01】 OverExpress 株の中でどれを選ぶべきですか？

任意のタンパク質を発現させる場合に、4種類のOverExpress 株（（C41(DE3)，C43(DE3)，C41(DE3)pLysS，C43(DE3)pLys））の中でどれが最適かを予測することは困難です。はじめてご利用いただく際には、4種類のOverExpressコンピテントセルが各3反応分セットになっている ComboPack をご利用いただき、ご自身のアプリケーションに最適な菌株を決定することをおすすめしています。

本製品は、ケミカルコンピテントセルとエレクトロコンピテントセルからお選び頂けます。C41(DE3) および C43(DE3) のいずれも内在性の抗生物質耐性（またはプラスミド）を持たないため、pAVD10 確認用ベクターを形質転換することでそれぞれの菌株とBL21(DE3) を区別することができます。pAVD10 は、T7プロモーターの制御下にある uncF 遺伝子（大腸菌 ATPaseのβサブユニットをコードする）を含んでいます。このプラスミドは、BL21(DE3) とC41（DE3) に導入すると致死作用を示しますが、C43(DE3) では許容されます。pAVD10 は、各OverExpressコンピテントセル製品に付属しています。

【02】どのような場合にOverExpressコンピテントセルを使用する必要がありますか？

OverExpressコンピテントセルは、毒性を示すタンパク質や膜タンパク質をT7系で発現させる場合に使用できます。これらの有効性は、細菌、酵母、植物、ウイルス、および哺乳動物を含む全クラスの生物由来の毒性タンパク質発現で実証されています。

【03】なぜ、OverExpressコンピテントセルは毒性タンパク質の発現に適しているのですか？

OverExpress 細胞は、毒性タンパク質に対する耐性を付与するために表現型から選抜された遺伝子変異を含みます。BL21(DE3)由来のC41(DE3) 株は、毒性を持つ多くのリコンビナントタンパク質発現にともなう細胞死を防ぐための変異を少なくとも一つ含んでいます。C43(DE3) 株は、C41(DE3) 由来で、C41(DE3) とは異なる毒性タンパク質に対する耐性で選抜しているため、C41(DE3) とは異なる毒性タンパク質を発現することができます。

構成内容

コンピテントセル
Expression Recovery Medium^※（ラクトース(-))
pUC19 ポジティブコントロール
pAVD10 確認用プラスミド
プロトコール

※Expression Recovery Mediumは別売もございます。

OverExpress™ Competent cell

OverExpress™ C41 (DE3)

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
OverExpress^TM C41 (DE3) Electrocompetent Cells (SOLOs)	LUC	60341-1	12 RXN	￥59,000
OverExpress^TM C41 (DE3) Electrocompetent Cells (SOLOs)	LUC	60341-2	24 RXN	￥105,000
OverExpress^TM C41 (DE3) Chemically Competent Cells (SOLOs)	LUC	60442-1	12 RXN	￥44,000
OverExpress^TM C41 (DE3) Chemically Competent Cells (SOLOs)	LUC	60442-2	24 RXN	￥66,000

OverExpress™ C41 (DE3)　pLysS株

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
OverExpress^TM C41 (DE3) pLysS Chemically Competent Cells (SOLOs)	LUC	60444-1	12 RXN	￥44,000
OverExpress^TM C41 (DE3) pLysS Chemically Competent Cells (SOLOs)	LUC	60444-2	24 RXN	￥66,000

OverExpress™ C43 (DE3)

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
OverExpress^TM C43 (DE3) Electrocompetent Cells (SOLOs)	LUC	60345-1	12 RXN	￥59,000
OverExpress^TM C43 (DE3) Electrocompetent Cells (SOLOs)	LUC	60345-2	24 RXN	￥105,000
OverExpress^TM C43 (DE3) Chemically Competent Cells (SOLOs)	LUC	60446-1	12 RXN	￥44,000
OverExpress^TM C43 (DE3) Chemically Competent Cells (SOLOs)	LUC	60446-2	24 RXN	￥66,000

OverExpress™ C43 (DE3)　pLysS株

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
OverExpress^TM C43 (DE3) pLysS Chemically Competent Cells (SOLOs)	LUC	60448-1	12 RXN	￥44,000
OverExpress^TM C43 (DE3) pLysS Chemically Competent Cells (SOLOs)	LUC	60448-2	24 RXN	￥66,000

OverExpress™ ComboPack

品番60452-1は、品番60442、60444、60446、60448の4菌株がそれぞれ3rxnずつ入ったパックです。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
OverExpress^TM ChemComboPack (SOLOs)	LUC	60452-1	12 RXN	￥44,000

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【ご注意】
上記商品は、2004年2月19日に施行されました「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律」（通称カルタヘナ法）の使用規制対象品です。ご使用に際しては、規則に則し、適切にお取扱いください。

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

※ 表示価格について

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毒性タンパク質の発現に有用なコンピテントセルLucigen社 OverExpress™ Competent cell

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特長

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