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記事ID : 16194
研究用

10分間で高速分離・精製!10分間 トータルタンパク質抽出キット(細胞壁を含む微生物用)

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本製品は、細胞壁を持つ微生物からタンパク質を抽出するためのキットです。特別な器具を必要とせず、迅速かつ穏やかに抽出することができます。本製品でタンパク質抽出が可能な微生物には、酵母、糸状菌、グラム陰性/グラム陽性細菌だけではなく、微細藻類や昆虫の卵も含まれます。

全体の操作時間は、10分以内で完了し、得られるタンパク質の収量は 2-5 mg/mL です。抽出したタンパク質は、SDS-PAGE、ウェスタンブロッティング、IP、ELISA、酵素活性アッセイおよびプロテオミクス分析に使用することができます。バッファーは、Hisタグタンパク質精製用のIMAC樹脂と互換性があります。

101 Bio社 高速・簡便なタンパク質抽出キット

使用目的

従来の厚い細胞壁を持つ微生物(酵母、糸状菌、グラム陰性/グラム陽性菌、微細藻類、昆虫の卵等)からタンパク質を抽出する方法は、非常に煩雑で時間と労力を要するものでした。

本製品は、これらの微生物サンプルから簡単・迅速かつ穏やかに、高品質のタンパク質を抽出することが可能です。8M尿素を用いた厳しい条件、ガラスビーズを用いた溶解、アルカリによるサンプルの煮沸等を必要とせずに、簡便なプロトコールで抽出することができます。

本製品を酵母で使用した場合、偏りなく完全な範囲のタンパク質を抽出することができます。(他社製品では、特定範囲の分子量を持つタンパク質が優先的に抽出される場合があります)。また、本キットは、対数期および静止期の両方の菌に使用することができます。

特長

  • 迅速 - 10分以内
  • 高収量 - 2〜5 mg/mL
  • 酵母タンパク質を偏りなく、完全な範囲で抽出可能

構成内容

  • 変性バッファー
  • 非変性バッファー
  • タンパク質抽出粉末
  • 乳棒(1.5 mL遠心マイクロチューブ用)
  • 1.5 mL遠心マイクロチューブ

プロトコール

  1. 微生物を1.5 mL チューブで遠心分離して回収します。
    回収後のペレットの湿潤体積が20〜30μLの間にあることを確認してください。
  2. 1mLの水でペレットを洗浄します。トップスピードで2分間遠心後、上清を完全に除去します。80〜90 mgのタンパク質抽出粉末を秤量し、チューブの底に添加します。20 µLの変性バッファーまたは非変性バッファーを加えます。
  3. 付属の乳棒で2分間、サンプルを破砕します。手順2で使用した変性バッファーまたは非変性バッファーを150〜200μL添加し、さらに約30秒間粉砕を継続します。チューブの蓋を閉め、10秒間ボルテックスします。
  4. トップスピードで3〜4分間遠心後、上清を新しいチューブに移します(トータルタンパク質抽出完了)。
    より多くの収量を得るには、手順3と4をもう一度繰り返します。通常のタンパク質収量は、変性バッファー使用時で3〜5 mg/mL、非変性バッファー使用時で2〜3 mg/mLです。抽出したタンパク質は、-80℃で保存することができます。

注:

  • プロテアーゼ阻害剤の使用は必須ではありません。下流側のアプリケーションでかなりの時間を要するか、タンパク質抽出物をより長い期間保存される場合には、抽出バッファーへのプロテアーゼ阻害剤の添加が推奨されます。
  • タンパク質濃度測定は、BCAキットをおすすめします。
  • タンパク質のリン酸化研究には、ホスファターゼ阻害剤をバッファーに添加してください。

使用例

S. cereviseae(出芽酵母)、糸状菌、L. Lactis(グラム陽性菌)からのタンパク質抽出
S. cereviseae
(出芽酵母)、糸状菌、L. Lactis(グラム陽性菌)からのタンパク質抽出
異なる微生物から抽出したタンパク質をSDS-PAGE(12%)で解析した。

10分間 トータルタンパク質抽出キット(細胞壁を含む微生物用)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Thick cell wall microbes protein kit詳細データ OBL P515-50 50 RXN
¥112,000

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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