最高かつ最も堅牢なDNAゲル染色 AAT Bioquest社 Gelite™ Safe DNA ゲル染色

Gelite™SafeDNAゲル染色は、電気泳動ゲル中のDNAを視覚化する高感度で安定した蛍光色素です。毒性の高い臭化エチジウム（EtBr）と比較して、危険性が低く、細胞毒性や変異原性が低減されています。また EtBr や従来品よりも感度が高くバックグラウンド蛍光が低くなっています。Gelite™Safe の独自のスペクトル特性により、機器の互換性が広がります (UVおよび青色光トランスイルミネーター、ゲルドキュメンテーションシステム、レーザースキャナーが含まれます)。また、単一の配合設計により、緑または赤の両方のチャネルで検出が可能です。

Gelite™Safeは、水溶液またはDMSO溶液のいずれかの濃縮液として提供されていますので希釈して EtBr の代替品としてご使用いただけます。キャピラリー電気泳動でのDNA染色にも適しており、精製、クローニング、シーケンスなどのダウンストリームアプリケーションと互換性があります。

• 保存温度変更のお知らせ　(2021年12月7日）

臭化エチジウム（EtBr）は、低コストと十分な感度から長年にわたって主要なゲル染色剤として使用されています。その毒性および変異原性の危険性により、最終的には廃棄が困難になり、安全に使用することは難しくなっています。Gelite™Safeは、アガロースやポリアクリルアミドゲル中の DNA を視覚化する EtBr の代替品となるように特別に配合されています。膜不透過性色素のため、生細胞に浸透してDNAに結合することがないので、ゲルを実質的に非細胞毒性および非変異原性にします。さらに、Ames試験では、ゲル染色に使用される作業濃度をはるかに超える高濃度でも、非変異原性が確認されています。そのため、EtBrやその他のいわゆる「安全なゲル染色剤」よりも優れた感度と汎用性を提供します。

■最高感度

Gelite™Safeは本質的に非蛍光性であり、ゲル内でのバックグラウンド蛍光は最小限です。DNAに結合すると EtBr よりも数桁大きい有意な蛍光増強を示します。300 nm UVトランスイルミネーターと ChemiDoc™イメージングシステム（Bio-Rad®）では、Gelite™Safeではバンドあたりわずか0.5 ng の dsDNAを検出できます（図1）。最適な感度を得るために洗浄ステップは必要ありません。Gelite™Safe はDNAに固有であるため、サンプルにRNAが存在するアプリケーションでも結果が不明瞭になることはありません。

図1. Gelite™Safe、EtBr、および 他社製品A を使用したTBEバッファー中の 1 ％ アガロースゲルにおけるDNA検出の比較
1 kb DNAラダーの2倍段階希釈液を、左から右に100 ng、50 ng、25 ng の量でロードした。各メーカーの推奨濃度に従って Gelite™Safe、EtBr、他社製品A でゲルを 60 分間染色し、ChemiDoc™Imaging System（Bio-Rad®）で撮影した。GelGreen および GelRedフィルターを備えた 300 nmトランスイルミネーターでゲルを照射した。

■安全性の向上

EtBr や 他社製品B と比較して、Gelite™Safe は変異原性が大幅に低く、Salmonellatyphimurium株 TA1538 を用いた Ames試験では、0.2µg ~ 10µg /プレートの用量範囲での変異は殆ど確認されず、肝臓抽出物S9画分で活性化した後にのみ弱い陽性結果を示しました。さらに、Gelite™Safe は膜不透過性のため、色素が生細胞に浸透してそのDNAと相互作用するのを防ぎ、実質的に非細胞毒性、非発がん性を実現します。不浸透性の結果として、Gelite™Safeは環境にも安全であり、迅速かつ簡単に廃棄できます。

図2. Ames試験結果の要約
Ames変異原性試験は、Gelite™Safe、他社製品B、EtBr に対して用量依存的に実施した。サンプルを肝臓抽出物S9画分で前処理してから試験した。S. Typhimurium株TA1538 において、バックグラウンドの2倍を超える復帰突然変異体の増加を変異原性の陽性結果として示している。

■機器の互換性

Gelite™Safe の重要な特徴は、その幅広い励起と蛍光プロファイルです。2つの最大吸光度が~300 nmと~512 nm にあるため、UVや青色光トランスイルミネーター、ゲルドキュメンテーションシステム、レーザースキャナーなどのさまざまな機器と互換性があります。さらに、Gelite™Safe の広い蛍光スペクトルにより、緑、赤の両方のチャネルでの検出が可能になります。Gelite™Safe は、EtBr、GelStar®、Gel Green、Gel Red、SYBR®フィルターセットと互換性があります。

図3. DNA存在下で測定された Gelite™Safe DNAゲル染色の正規化された励起および発光スペクトル
Gelite™Safe は、280 nmのUV領域と513 nmの可視領域に最大励起を示すため 254 nm（左の黒い線）、300 nm（中央の黒い線）、または 488 nm（青い線）のレーザーを備えた機器で励起が可能です。また、552 nmで最大蛍光を含む幅広い蛍光スペクトルを持つため、602/50 nm（EtBr）または590 / 110nmフィルターセットのいずれかで検出が可能です。

■多様性

Gelite™Safe は、アガロースやポリアクリルアミドゲル中のDNAの検出に適しています。Gelite™Safe の強力なDNA結合親和性により、電気泳動の前後にゲルを脱色せずに染色できます。最適な感度を得るには、実験条件（ゲルの厚さや組成など）に応じて、Gelite™Safe染色液でゲルを30〜60分間インキュベートする後染色法をお勧めします。

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