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AAT Bioquest NEWS 2021年 10月号_4 カスパーゼ9アッセイ

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メーカー名：AAT Bioquest, Inc. (Former ABD Bioquest, Inc.)

図1. スタウロスポリン添加のカスパーゼ9への影響
Cell Meter™ Live Cell Caspase 9 Binding Assay Kit (品番：20117)を用いて、Jurkat細胞にスタウロスポリンを添加する前(左)と後(右)の蛍光強度を比較した。FAM-LEHD-FMKを基質として用いている。蛍光強度は、FITCチャンネルを備えた蛍光顕微鏡で観察した。

カスパーゼは、アポトーシス、ネクローシス、パイロトーシスのプロセスに密接に関連した複数の機能を持つプロテアーゼ酵素のファミリーです。
カスパーゼ9は、Leu-Glu-His-Asp (LEHD)というペプチド配列に選択性があることが知られており、この配列は、アポトーシス細胞における活性化したカスパーゼ9の定量や、カスパーゼ9阻害剤のスクリーニング等に利用されています。

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図2. カスパーゼ9活性の検出
Z-LEHD-ProRed™ 620 (品番：13435) を用いてJurkat細胞のカスパーゼ9活性を測定した。
播種した同日に、細胞を1µMのスタウロスポリン有/無の条件で4時間処理した。
ZLEHD-ProRed™ 620 working solutionを加え、室温で1時間インキュベート後、蛍光マイクロプレートリーダーを用いて、Ex/Em = 540/620 nmで蛍光強度を測定した。