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記事ID : 16668
研究用

アデノ随伴ウイルス粒子をヘルパーフリーで簡便にパッケージング可能AAV Packaging Mix

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アデノ随伴ウイルス(AAV)粒子をヘルパーフリーで作製するためのパッケージングミックスです。
セロタイプ1〜6のパッケージングミックスをラインアップしており、トランスフェクション試薬DNAFectin™が付属するコンボパックも提供しております。

背景

ヘルパーフリーアデノ随伴ウイルス(AAV)粒子の作製には、以下の3つのコンポーネントが必要です。

  1. 目的のインサート配列(cDNA、shRNA、miRNA)を含むAAV発現ベクター
  2. ヘルパーアデノウイルスの必要性を排除する、アデノウイルス由来遺伝子を含むパッケージングベクター
  3. AAVのセロタイプ(血清型)および指向性を決定するRep(replication)とCap(capsid)タンパク質を発現するパッケージングベクター

Applied Biological Materials社のAAV発現ベクターは、全て野生型ITR配列を含み、いずれかのセロタイプ特異的パッケージングミックスを使用してパッケージングすることができます。パッケージングミックスはプレミックスタイプで提供されるため、発現ベクターと特定のセロタイプパッケージングミックスを混合してトランスフェクションされます。各キットに含まれるパッケージングミックスは109 GC/mL の力価で3つのウイルスをパッケージングするために十分な量が含まれ、 DNAFectin™ transfection reagent(1ml、品番:G2100)が付属するコンボパックもございます。

特長

品番 品名 Packaging Mix
セロタイプ
DNAFectin™
付属の有無
ベクターマップ
AAV1001 AAV Packaging Mix (Serotype 1) セロタイプ 1 -

pAAV-Helperベクター
※pAAV-Helperベクターは共通です。

pAAV-R2C1ベクター

AAV1001-G2100 AAV Packaging Mix (Serotype 2) & DNAFectin™ Combo Pack
AAV1002 AAV Packaging Mix (Serotype 1) セロタイプ 2 -

pAAV-R2C1ベクター

AAV1002-G2100

AAV Packaging Mix (Serotype2) & DNAFectin™ Combo Pack

AAV103 AAV Packaging Mix (Serotype 1) セロタイプ 3

-

pAAV-R2C1ベクター

AAV1003-G2100 AAV Packaging Mix (Serotype 1) & DNAFectin™ Combo Pack
AAV1004 AAV Packaging Mix (Serotype 1) セロタイプ 4 -

pAAV-R2C1ベクター

AAV1004-G2100

AAV Packaging Mix (Serotype 1) & DNAFectin™ Combo Pack

AAV1005 AAV Packaging Mix (Serotype 1) セロタイプ5 -

pAAV-R2C1ベクター

AAV1005-G2100

AAV Packaging Mix (Serotype 1) & DNAFectin™ Combo Pack

AAV1006 AAV Packaging Mix (Serotype 1) セロタイプ 6 -

pAAV-R2C1ベクター

AAV1006-G2100

AAV Packaging Mix (Serotype 1) & DNAFectin™ Combo Pack

プロトコール

パッケージング

[プロトコール詳細] AAV Packaging Mix Protocol PDF

DAY 1
1. 15cm ディッシュにHEK293 細胞を播種します(〜1.2 x 107)。
DAY 2
2. 細胞が70〜80%コンフルエントであることを確認します。
3. 各15cm ディッシュに対して、以下のトランスフェクション複合体を調製します。
 

a)
溶液A:

  • gene of interest 10µg
  • AAVパッケージングミックス(AAV1001、AAV1002、AAV1003、AAV1004、AAV1005、AAV1006)10µg in 3 mL serum-free, antibiotic- free medium

 

溶液B:227µL DNAFectin™ Transfection Reagent(G2100)in 3mL serum-free, antibiotic-free medium

b)溶液AおよびBを室温で5分間インキュベートします。

c)溶液Aと溶液Bを混合し、室温で20分間インキュベートします(トランスフェクション複合体)。

4. トランスフェクション複合体に無血清、抗生物質フリーの培地12mL を加えます。
5. 15cm ディッシュから培地を除去します。
6. ステップ4で調製したトランスフェクション複合体を細胞に加え、37℃で5〜8時間インキュベートします。
7. 1.5mL のFBSを加え、細胞を一晩インキュベートします。
DAY 3/DAY 4
8. 細胞変性効果(CPE:cytopathic effects)を確認するために細胞をモニターします。
通常、3日目/4日目にCPEは観察されます。
9. 5日目まで細胞をインキュベートします。
DAY 5
10. trypsin-EDTAまたはセルスクレーパーで細胞を回収し、3,000rpm、4℃で15分間遠心してペレットにします。
11. 上清を除去し、250μl の滅菌済1X PBSで2回洗浄します。
12. 細胞ペレットを-80°Cで3回凍結融解させ、37℃でウイルスを上清に放出させます。
13. 10,000rpm で20分間遠心します。
14. 0.45µM のタンパク質低吸着の滅菌フィルターに通します。
15. フィルターにかけた上清は、さらに精製するか下流のアプリケーションに利用できます。
または、-80℃でウイルスストックとして保存できます。

 

インフェクション

[プロトコール詳細] AAV Infection Protocol PDF

AAV Packaging Mix

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
AAV Packaging Mix (Serotype 1)詳細データ APB AAV1001 100 UG
¥92,000
AAV Packaging Mix (Serotype 1) & DNAfectin Combo Pack詳細データ APB AAV1001-G2100 1 KIT
¥115,000
AAV Packaging Mix (Serotype 2)詳細データ APB AAV1002 100 UG
¥92,000
AAV Packaging Mix (Serotype 2) & DNAfectin Combo Pack詳細データ APB AAV1002-G2100 1 KIT
¥115,000
AAV Packaging Mix (Serotype 3)詳細データ APB AAV1003 100 UG
¥92,000
AAV Packaging Mix (Serotype 3) & DNAfectin Combo Pack詳細データ APB AAV1003-G2100 1 KIT
¥115,000
AAV Packaging Mix (Serotype 4)詳細データ APB AAV1004 100 UG
¥92,000
AAV Packaging Mix (Serotype 4) & DNAfectin Combo Pack詳細データ APB AAV1004-G2100 1 KIT
¥115,000
AAV Packaging Mix (Serotype 5)詳細データ APB AAV1005 100 UG
¥92,000
AAV Packaging Mix (Serotype 5) & DNAfectin Combo Pack詳細データ APB AAV1005-G2100 1 KIT
¥115,000
AAV Packaging Mix (Serotype 6)詳細データ APB AAV1006 100 UG
¥92,000
AAV Packaging Mix (Serotype 6) & DNAfectin Combo Pack詳細データ APB AAV1006-G2100 1 KIT
¥115,000

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品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
DNAfectin 2100 Transfection Reagent詳細データ APB G2100 1 ML
[1.0 mg/1.0 ml]
¥19,000
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¥2,000
Recombinant Trypsin EDTA Solution (Animal Component-Free)詳細データ BLG 03-079-1A 500 ML
¥7,500
Recombinant Trypsin EDTA Solution (Animal Component-Free)詳細データ BLG 03-079-1B 100 ML
¥2,700

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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