アデノ随伴ウイルス(AAV)粒子をヘルパーフリーで作製するためのパッケージングミックスです。
セロタイプ1〜6のパッケージングミックスをラインアップしており、トランスフェクション試薬DNAFectin™が付属するコンボパックも提供しております。
- [関連情報] 特集:アデノ随伴ウイルス(AAV)による遺伝子導入方法
アデノ随伴ウイルス(AAV)粒子をヘルパーフリーで作製するためのパッケージングミックスです。
セロタイプ1〜6のパッケージングミックスをラインアップしており、トランスフェクション試薬DNAFectin™が付属するコンボパックも提供しております。
ヘルパーフリーアデノ随伴ウイルス(AAV)粒子の作製には、以下の3つのコンポーネントが必要です。
Applied Biological Materials社のAAV発現ベクターは、全て野生型ITR配列を含み、いずれかのセロタイプ特異的パッケージングミックスを使用してパッケージングすることができます。パッケージングミックスはプレミックスタイプで提供されるため、発現ベクターと特定のセロタイプパッケージングミックスを混合してトランスフェクションされます。各キットに含まれるパッケージングミックスは109 GC/mL の力価で3つのウイルスをパッケージングするために十分な量が含まれ、 DNAFectin™ transfection reagent(1ml、品番:G2100)が付属するコンボパックもございます。
品番 | 品名 | Packaging Mix セロタイプ | DNAFectin™ 付属の有無 | ベクターマップ |
---|---|---|---|---|
AAV1001 | AAV Packaging Mix (Serotype 1) | セロタイプ 1 | - | |
AAV1001-G2100 | AAV Packaging Mix (Serotype 2) & DNAFectin™ Combo Pack | 〇 | ||
AAV1002 | AAV Packaging Mix (Serotype 1) | セロタイプ 2 | - | |
AAV1002-G2100 |
AAV Packaging Mix (Serotype2) & DNAFectin™ Combo Pack |
〇 | ||
AAV103 | AAV Packaging Mix (Serotype 1) | セロタイプ 3 |
- |
|
AAV1003-G2100 | AAV Packaging Mix (Serotype 1) & DNAFectin™ Combo Pack | 〇 | ||
AAV1004 | AAV Packaging Mix (Serotype 1) | セロタイプ 4 | - | |
AAV1004-G2100 |
AAV Packaging Mix (Serotype 1) & DNAFectin™ Combo Pack |
〇 | ||
AAV1005 | AAV Packaging Mix (Serotype 1) | セロタイプ5 | - | |
AAV1005-G2100 |
AAV Packaging Mix (Serotype 1) & DNAFectin™ Combo Pack |
〇 | ||
AAV1006 | AAV Packaging Mix (Serotype 1) | セロタイプ 6 | - | |
AAV1006-G2100 |
AAV Packaging Mix (Serotype 1) & DNAFectin™ Combo Pack |
〇 |
[プロトコール詳細] AAV Packaging Mix Protocol
DAY 1 | |
1. | 15cm ディッシュにHEK293 細胞を播種します(〜1.2 x 107)。 |
DAY 2 | |
2. | 細胞が70〜80%コンフルエントであることを確認します。 |
3. | 各15cm ディッシュに対して、以下のトランスフェクション複合体を調製します。 |
a)
溶液B:227µL DNAFectin™ Transfection Reagent(G2100)in 3mL serum-free, antibiotic-free medium b)溶液AおよびBを室温で5分間インキュベートします。 c)溶液Aと溶液Bを混合し、室温で20分間インキュベートします(トランスフェクション複合体)。 |
|
4. | トランスフェクション複合体に無血清、抗生物質フリーの培地12mL を加えます。 |
5. | 15cm ディッシュから培地を除去します。 |
6. | ステップ4で調製したトランスフェクション複合体を細胞に加え、37℃で5〜8時間インキュベートします。 |
7. | 1.5mL のFBSを加え、細胞を一晩インキュベートします。 |
DAY 3/DAY 4 | |
8. | 細胞変性効果(CPE:cytopathic effects)を確認するために細胞をモニターします。 通常、3日目/4日目にCPEは観察されます。 |
9. | 5日目まで細胞をインキュベートします。 |
DAY 5 | |
10. | trypsin-EDTAまたはセルスクレーパーで細胞を回収し、3,000rpm、4℃で15分間遠心してペレットにします。 |
11. | 上清を除去し、250μl の滅菌済1X PBSで2回洗浄します。 |
12. | 細胞ペレットを-80°Cで3回凍結融解させ、37℃でウイルスを上清に放出させます。 |
13. | 10,000rpm で20分間遠心します。 |
14. | 0.45µM のタンパク質低吸着の滅菌フィルターに通します。 |
15. | フィルターにかけた上清は、さらに精製するか下流のアプリケーションに利用できます。 または、-80℃でウイルスストックとして保存できます。 |
[プロトコール詳細] AAV Infection Protocol
品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
---|---|---|---|---|
AAV Packaging Mix (Serotype 1) | APB | AAV1001 | 100 UG |
お問い合わせ |
AAV Packaging Mix (Serotype 1) & DNAfectin Combo Pack | APB | AAV1001-G2100 | 1 KIT |
販売終了 |
AAV Packaging Mix (Serotype 2) | APB | AAV1002 | 100 UG |
お問い合わせ |
AAV Packaging Mix (Serotype 2) & DNAfectin Combo Pack | APB | AAV1002-G2100 | 1 KIT |
お問い合わせ |
AAV Packaging Mix (Serotype 3) | APB | AAV1003 | 100 UG |
お問い合わせ |
AAV Packaging Mix (Serotype 3) & DNAfectin Combo Pack | APB | AAV1003-G2100 | 1 KIT |
お問い合わせ |
AAV Packaging Mix (Serotype 4) | APB | AAV1004 | 100 UG |
お問い合わせ |
AAV Packaging Mix (Serotype 4) & DNAfectin Combo Pack | APB | AAV1004-G2100 | 1 KIT |
お問い合わせ |
AAV Packaging Mix (Serotype 5) | APB | AAV1005 | 100 UG |
お問い合わせ |
AAV Packaging Mix (Serotype 5) & DNAfectin Combo Pack | APB | AAV1005-G2100 | 1 KIT |
お問い合わせ |
AAV Packaging Mix (Serotype 6) | APB | AAV1006 | 100 UG |
お問い合わせ |
AAV Packaging Mix (Serotype 6) & DNAfectin Combo Pack | APB | AAV1006-G2100 | 1 KIT |
お問い合わせ |
品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
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DNAfectinTM 2100 Transfection Reagent | APB | G2100 | 1 ML [1.0 mg/1.0 ml] |
販売終了 |
Trypsin Solution C (0.05%), EDTA (0.02%), with Phenol Red | BLG | 03-053-1B | 100 ML |
販売終了 |
Recombinant Trypsin EDTA Solution (Animal Component-Free) | BLG | 03-079-1A | 500 ML |
SSJ社 030791A 500 を参照 |
Recombinant Trypsin EDTA Solution (Animal Component-Free) | BLG | 03-079-1B | 100 ML |
SSJ社 030791B 100 を参照 |
商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。
※ 表示価格について
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