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ヒトC型肝炎ウイルス（HCV）のウイルスロード（感染細胞率）を定量 AMPIPROBE® HCV アッセイキット

メーカー名：Enzo Life Sciences,Inc.

血漿または血清中のヒトC型肝炎ウイルス（HCV: hepatitis C virus）のウイルスロード（感染細胞率）を定量できる、高感度な RT-qPCR アッセイキットです。

背景

ヒトC型肝炎ウイルス（HCV: hepatitis C virus）

HCVは、3,000 アミノ酸をコードする、約 9,500 ヌクレオチドからなる一本鎖のプラス鎖RNAをゲノムに持ちます。6つの遺伝子型（ジェノタイプ）に分類されています。

HCVには、アメリカで400万人、全世界では約1億7千万人が感染しています。HCVの急性感染は、慢性感染に移行する場合が多く見られます。治療せずに放置すると、肝線維症、肝硬変、非代償性肝疾患に進行し、死に至る場合があります。また、肝硬変患者の25％は肝細胞癌を発症します。

使用目的

ヒトC型肝炎ウイルス（HCV: hepatitis C virus）RNA を定量的に検出できる、定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（RT-qPCR）アッセイキットです。
キットには、HCV 遺伝子型 1～6 に特異的なプライマーミックスが含まれています。また、High、Medium、Low HCV コントロールが含まれており、IU/mL の単位でウイルスを定量できます。さらに、抽出コントロールにより、核酸の適切な抽出が可能です。

特長

HCVのウイルスロード高感度に定量
多くの qPCR オープンプラットフォームに対応
コントロールセットが付属（定量コントロール、内部サンプル抽出コントロール、ネガティブコントロール）
インプット量が少ないため、残った抽出サンプルを他の試験に使用可能

原理

AMPIPROBE® キットでは、プライマー設計にプローブ検出技術を採用しています。レポーター蛍光色素で標識したプライマーとクエンチャーで標識したプライマーの組み合わせを用いて、従来のPCRと同様にDNAを増幅します。蛍光標識プライマーは、溶液中に遊離した状態の時にシグナルを発します。しかし、プライマーが増幅したDNAに組み込まれると、クエンチャーと蛍光色素が近接し、Forster 共鳴エネルギー転移（FRET）が起こります。FRETにより、DNAの増幅サイクル数に対してシグナルが対数的に減衰します。シグナルが定義された閾値（threshold）に減衰すると、対応するサイクルに対して値（Ct値）が算出されます。このCt値は、サンプル中の標的RNAまたはDNAの量を示します。

図1　AMPIPROBE® HCV アッセイキットの原理