生体試料中のアスパラギン酸(塩)を簡便かつ高感度に定量 Amplite™ アスパラギン酸(塩)アッセイ　(比色 / 蛍光)

Amplite™アスパラギン酸(塩)アッセイは、生体試料中のアスパラギン酸(塩)を簡便かつ高感度に定量するキットです。

アスパラギン酸塩またはアスパラギン酸は、負に荷電した極性のα-アミノ酸です。主にアミノ基転移反応によりオキサロ酢酸から合成され、多くの生化学的役割に関与しています。それは、尿素サイクルにおける代謝物であり、代謝経路の糖新生に関与します。また、いくつかの他のアミノ酸およびホルモンの前駆体であり、NMDA受容体を刺激する神経伝達物質として作用します。

原理

本アッセイでは、まずアスパラギン酸塩をピルビン酸に変換し、次に酵素結合反応を利用して過酸化水素を生成します。生成された過酸化水素のレベルは、独自のAmplite™Red基質で検出されます。このアッセイでは、吸光マイクロプレートリーダー（575 nm）または蛍光マイクロプレートリーダー（Ex / Em = 540 / 590 nm）を用いて、シグナルを検出します。

• 高感度：比色 / 6.25 µMのアスパラギン酸(塩)を検出
             蛍光 / 0.4 µMのアスパラギン酸(塩)を検出

• Component A: Amplite™ Red Substrate
• Component B1: Enzyme Mix 1
• (Component B2: Enzyme Mix 2 蛍光アッセイキットのみ)
• Component C: Assay Buffer
• Component D: Conversion Mix
• Component E: Aspartate Standard
• Component F: DMSO

1. テストサンプルの調整（段階希釈したアスパラギン酸塩を使用）
2. 同量のワーキング試薬を添加Add equal volume of working solution (50 ?L)
3. 37℃で20-30分インキュベートIncubate at 37°C for 20 - 30 minutes
4. OD 575±5 nmで吸光度測定。または蛍光強度（Ex/Em = 540/590 nm）で測定

図.1 Amplite™ 比色 アスパラギン酸(塩)アッセイキットによるアスパラギン酸(塩)の用量反応
96ウェルクリアプレート、SpectraMax マイクロプレートリーダー (Molecular Devices)で測定
37℃で20〜30分間のインキュベーションにて、6.25 µMのアスパラギン酸(塩)を検出

図.2 Amplite™蛍光アスパラギン酸(塩)アッセイキットによるアスパラギン酸(塩)の用量反応
96ウェル黒色プレート、Geminiマイクロプレートリーダー（Molecular Devices）で測定
インキュベーション時間：20〜30分にて、0.4 µMのアスパラギン酸(塩)を検出

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