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さまざまな生体試料中のアンモニアを定量！ Amplite™ 比色アンモニア定量アッセイ

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メーカー名：AAT Bioquest, Inc. (Former ABD Bioquest, Inc.)

Amplite™ 比色アンモニア定量アッセイは、血清、血漿、尿などの生体試料中のアンモニア/アンモニウム濃度を迅速、簡単、かつ安定的に定量するキットです。

背景

アンモニアは生物系にとって重要な窒素源です。アミノ酸合成に必要であり、動物では酸/塩基バランスに不可欠です。アンモニアはアミノ酸代謝によって生合成され、高濃度では毒性を示します。肝細胞は、アンモニアを毒性が低く塩基性が低い尿素に変換することで、アンモニア濃度の管理に役立っています。尿素回路の酵素の欠陥による血中アンモニア濃度の上昇（高アンモニア血症）は、肝硬変などの肝機能障害に関連しています。

原理

本アッセイは、アンモニアと反応すると青色の生成物を生じる独自のアンモニアセンサーを利用します。着色反応生成物の強度は、サンプル中のアンモニア濃度に比例します。このアッセイでは、吸光マイクロプレートリーダー（665 nm）を用いて、シグナルを検出します。

特長

自動化に最適：溶液除去や分離操作不要
96ウェルまたは384ウェルのマイクロタイタープレートに対応
感度：4 µMのアンモニアを検出

プロトコール概要

塩化アンモニウムスタンダード及びテストサンプルの調整
アッセイバッファーIの添加
室温または37℃で5分インキュベート
アッセイバッファーIIの添加
室温で30-60分インキュベート
吸光度を660-670 nmで測定

製品データ

図.1 Amplite™比色アンモニア/アンモニウム定量キットによる塩化アンモニウムの用量反応
96ウェルクリアボトムプレート使用
Spectrum Maxマイクロプレートリーダー(Molecular Devices)で測定
アッセイ緩衝液IIを添加した後、45分のインキュベーション
4 µMのアンモニアを検出(n=3)