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溶液除去や分離操作不要で高感度に検出 Amplite™ 蛍光コエンザイムA定量アッセイ

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メーカー名：AAT Bioquest, Inc. (Former ABD Bioquest, Inc.)

Amplite™ 蛍光コエンザイムA定量アッセイは、生物学的サンプル中のコエンザイムAを超高感度に定量するためのキットです。

背景

補酵素=コエンザイムA（CoA）とはすべての細胞生物に存在する必須の補因子で、システイン、パントテン酸およびアデノシン三リン酸に由来する単位からなります。コエンザイムAは、多くの生合成、エネルギー生成、および分解経路における主要なアシル基キャリアです。そして、脂肪酸の合成および酸化、ならびにクエン酸回路におけるピルビン酸の酸化において重要な役割を果たします。コエンザイムAのレベルは、飢餓時や、ガン、糖尿病、アルコール依存症などの状況下で変化する可能性があります。

原理

本アッセイは、コエンザイムAのチオール（-SH）基を検出するために、独自の蛍光センサーCoA Green™を利用しています。CoA Green™は、チオール基と結合すると強い蛍光シグナルを生成します。シグナルの蛍光強度は溶液中のコエンザイムAの濃度に正比例します。本アッセイは、蛍光マイクロプレートリーダー(Ex/Em = 490/520 nm)を使用して、コエンザイムＡを検出することができます。

特長

溶液除去や分離操作不要でHTSアプリケーションに最適
96ウェルまたは384ウェルのマイクロタイタープレートに対応
高感度: 4 pmole of CoA /100 µL assay volume (40 nM)のコエンザイムＡを検出

構成内容

Component A: CoA Green™, 1 vial
Component B: Assay Buffer, 1 bottle (25 mL)
Component C: Coenzyme A (CoA) Standard (FW=767.53), 1 vial (154 µg)
Component D: DMSO, 1 vial (200 µL)

プロトコール概要

CoAワーキング試薬を調整
CoAスタンダート及びテストサンプルの調整
室温で10分-1時間インキュベート
蛍光強度をEx/Em = 490/520 nmで測定

製品データ

図.1 Amplite™蛍光コエンザイムA定量アッセイキットを用いたCoA用量反応の測定
96ウェルブラックプレート使用 / インキュベーション時間:30分
分析機器NOVOstarマイクロプレートリーダー（BMG Labtech）
40 nM（4 pmol／well）のCoAが検出された。(n=3)