細胞溶解物、体液、増殖培地などの生体サンプル中のグルコースを迅速かつ安定的に定量! Amplite™ グルコース定量アッセイ (比色 / 蛍光)

Amplite™ グルコース定量アッセイは、細胞溶解物、体液、増殖培地などの生体サンプル中のグルコースを直接測定するための迅速かつ安定的なキットです。

単糖類であるグルコースは、生物学において最も重要で広く使用されている炭水化物です。それはほとんどの生物にとって遍在するエネルギー源として役立ち、そしてデンプン、セルロースおよびグリコーゲンのようないくつかの他の分子の合成のための前駆体です。生体サンプル中のグルコースレベルの検出は、多くの代謝障害を評価するための重要な診断パラメータとして役立ちます。

原理

本酵素結合アッセイにおいて、グルコースはグルコースオキシダーゼによって酸化されて過酸化水素を生じます。生成された過酸化水素のレベルは、サンプル中のグルコース濃度に比例したシグナルを生じるAmplite™Redペルオキシダーゼ基質(発色性基質センサーまたは蛍光性基質センサー)を使用して測定されます。このアッセイでは、吸光マイクロプレートリーダー（575 nm）または蛍光マイクロプレートリーダー（Ex / Em = 540 / 590 nm）を用いて、シグナルを検出します。

• 自動化に最適：連続的で分離工程が不要
• 高感度：
  　比色 / 3 µＭのグルコースを検出
  　蛍光 / 0.1 µMのグルコースを検出

• Component A: Amplite™ Red (light-sensitive) 1 vial
• Component B: Assay Buffer 1 bottle (50 mL)
• Component C: Horseradish Peroxidase (HRP) 1 vial (10 units)
• Component D: Glucose Oxidase 1 vial (100 units)
• Component E: DMSO 1 vial (200 µL)
• Component F: Glucose 1 vial (144 mg)

1. 反応試薬の調整
2. グルコーススタンダードとテストサンプルの添加
3. 37℃で10-30分インキュベート
4. OD 570±5 nmで吸光度測定または蛍光強度（Ex/Em = 540/590 nm）で測定

図.1 Amplite™比色グルコース定量キット（品番#40004）によるグルコースの用量反応
96ウェルクリアボトムプレート使用
SpectraMaxマイクロプレートリーダー（Molecular Devices）, pathcheck® オンで測定
インキュベーション時間: 30分にて、3 µMのグルコースを検出（n=3）。

図.2 Amplite™ 蛍光グルコース定量キットを用いたグルコースの用量反応
96ウェル黒色プレート使用、Gemini蛍光マイクロプレートリーダー(Molecular Devices)で測定
インキュベーション時間:30分にて、0.1 µMのグルコースを検出 (n=3)

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