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生体サンプル中のオキサロ酢酸を高感度に定量 Amplite™ オキサロ酢酸アッセイ (比色 / 蛍光)

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メーカー名：AAT Bioquest, Inc. (Former ABD Bioquest, Inc.)

Amplite™ 比色オキサロ酢酸アッセイは、生体サンプル中のオキサロ酢酸を高感度に定量するキットです。

背景

オキサロ酢酸とは、多くの細胞プロセスで使用される重要な代謝中間体で、糖新生、アミノ酸合成、脂肪酸合成、クエン酸回路、尿素回路およびグリオキシル酸回路で利用されます。クエン酸回路では、オキサロ酢酸はアセチル-CoAと反応してクエン酸を生成します。糖新生では、ミトコンドリアに存在するピルビン酸分子がカルボキシル化され、オキサロ酢酸に変換されます。これは、下流のグルコース合成において、オキサロ酢酸のミトコンドリアマトリックスから細胞質への輸送を促進します。オキサロ酢酸は外傷性脳損傷後の神経保護をもたらす血中グルタミン酸スカベンジャーとしても使用され、海馬におけるニューロン損失の減少や神経学的転帰の改善の両方で発現します。

原理

本酵素結合アッセイでは、ピルビン酸はオキサロ酢酸に変換され、過酸化水素の副生成物を生じます。生成された過酸化水素のレベルは、サンプル中のオキサロ酢酸の濃度に比例したシグナルを発するAmplite™Red基質を使用してモニターされます。蛍光アッセイでも同様のアプローチを利用しています。このアッセイでは、吸光マイクロプレートリーダー（575 nm）または蛍光マイクロプレートリーダー（Ex / Em = 540 / 590 nm）を用いて、シグナルを検出します。

特長

高感度：
比色 / 5 µMのオキサロ酢酸を検出
蛍光 / 0.3 µMのオキサロ酢酸を検出

プロトコール概要

オキサロ酢酸スタンダード及びテストサンプルの調整
オキサロ酢酸ワーキング試薬の添加
室温で30-60分インキュベート
吸光度を575 nmで測定または蛍光強度Ex/Em = 540/590 nm (Cutoff = 570 nm)で測定

製品データ

図.1 Amplite™ 比色オキサロ酢酸アッセイキットによるオキサロ酢酸の用量反応
96ウェルクリアボトムプレート使用/ インキュベーション時間　30分間
SpectraMaxマイクロプレートリーダー（Molecular Devices）で測定
5 µMのオキサロ酢酸を検出

図.2 Amplite™ 蛍光オキサロ酢酸アッセイキットによるオキサロ酢酸の用量反応
96ウェル黒色プレート使用/ インキュベーション時間　30分間
Geminiマイクロプレートリーダー（Molecular Devices）で測定
0.3 µMのオキサロ酢酸を検出

Amplite™ オキサロ酢酸アッセイ (比色 / 蛍光)

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Amplite^(R) Colorimetric Oxaloacetate Assay Kit Red Color	ABD	13840	1 KIT [200 Tests]	￥84,000
Amplite^(R) Fluorimetric Oxaloacetate Assay Kit Red Fluorescence	ABD	13841	1 KIT [200 Tests]	￥84,000