記事ID ： 10520

FRET基質を用いて酵素活性を簡便に蛍光検出 SensoLyte® エンテロキナーゼ活性測定キット

メーカー名：Anaspec, Inc.

SensoLyte® エンテロキナーゼ活性測定キットは、エンテロキナーゼFRET基質を用いて酵素活性を測定する簡便なキットです。エンテロキナーゼ（Enterokinase）が基質を2 つの断片に分解することで生じる蛍光を検出します。

背景

エンテロキナーゼ（Enterokinase）は、十二指腸壁細胞によって産生されるセリンプロテアーゼで、トリプシノーゲンからトリプシンへの変換を担います。

タンパク質消化酵素として重要なため、欠乏時にはタンパク質吸収不良を生じ得ます。また急性膵炎においても重要な作用を有しています。組換え体タンパク質のタグ切断に利用されるように、エンテロキナーゼの基質特異性は極めて高く、重要な研究ツールとなっています。

SensoLyte® 520 エンテロキナーゼ活性測定キットは、内部消光性の5-FAM/QXL FRETエンテロキナーゼ基質を用いています。エンテロキナーゼがFRET 基質を2 つの断片に分解することにより、Ex/Em＝490/520nmで測定可能な5-FAMの蛍光が発せられます。5-FAMの蛍光波長は長波長なので、サンプル由来の自己蛍光の影響はわずかです。1.25na/f以上の活性エンテロキナーゼを検出できます。
SensoLyte® Rh110 エンテロキナーゼ活性測定キットは、エンテロキナーゼの切断によりEx/Em＝490/520nmで検出可能な緑色蛍光を発するローダミン110（Rh110）が生じます。長波長スペクトルを有し吸光係数も高いため、Rh110は高感度かつ反応構成物の影響を受けにくい特徴があります。0.31na/f 以上の活性エンテロキナーゼを検出できます。