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ioAstrocytes ヒト iPS 細胞由来アストロサイト｜Bit Bio社

メーカー名：Bit Bio Limited

ioAstrocytesはヒトiPS細胞由来のアストロサイトです。細胞には、ドキシサイクリンで転写因子の発現を誘導可能な「opti-ox」カセットが組み込まれており、細胞融解後、ドキシサイクリンを添加し培養することでアストロサイトへ分化させます。

使用目的

神経変性疾患モデリング
神経薬理学
神経炎症研究
貪食アッセイ
サイトカイン応答アッセイ
共培養研究

特長

共培養可能：ニューロンと共培養し、中枢神経系の機能解析に利用可能
機能的：貪食作用、サイトカイン分泌能あり
ばらつきが少ない：ロット間のばらつきが少なく、創薬や毒性評価のモデルとして利用可能

仕様

品質確認方法
細胞由来	ヒト iPS 細胞
ドナー	白人成人男性（皮膚繊維芽細胞）
包装	Small: >1 x 10⁶ cells
品質確認方法	・免疫染色・ RT-PCR
推奨播種密度	30,000 cells/cm²
使用可能なプレート	6、12、24、96、384 well plate

ioAstrocytesは凍結保存された状態で提供され、推奨培地で培養すると急速に成熟するようにプログラムされています。これらの細胞の分化プロトコルは3段階のプロセスで構成されており、２日間の安定化期間を経て、6日間のニューロンの成熟期間に入り、8日目以降は細胞の維持期間に入ります。

製品データ

細胞の形態

細胞は培養8日目から星型の形態を獲得する。（10X、400μmのスケールバー）

表現型マーカーの発現

(A)

(B)

ioAstrocytesは、細胞融解後15日目と22日目に主要なアストロサイトマーカーであるS100B、SOX9（A）、およびビメンチン（B）を発現していた。

ioAstrocytesは、分化後わずか8日目という早い段階から主要なアストロサイトマーカー（EAAT1,、SOX9,、S100B 、Vimentin (VIM)）の発現を示した。一方で多能性マーカー（POU5F1 [OCT4] および NANOG）の発現は低下していた。

サイトカイン分泌

培養15日目の細胞を３種類の炎症性サイトカインカクテル（T）とビークルコントロール（V）で処理し、24時間後に培地に含まれるサイトカイン濃度を測定した。炎症性サイトカイン処理をした細胞は、コントロール細胞と比較して優位にサイトカインの分泌を誘導した。
※炎症性サイトカインカクテルにIL-１βとTNFγが含まれているため、これらの物質で刺激した際には検出値が高くなることにご留意ください。

ロット間の一貫性

培養1日目および22日目の細胞に対して、3つの独立したロットでバルクRNAシーケンス分析を実行した。結果、各日数でロット間のクラスターが非常に近く、高い一貫性が示された。（発現遺伝子の差異は0.5%未満）

貪食作用

ioAstrocytes が Incucyte^® 用 pHrodo^® Red S. aureus Bioparticles^®を貪食する様子。
細胞融解後15日目のioAstrocytes培養物にpHrodo^® Red S. aureus Bioparticles^®（黄色ブドウ球菌に赤色蛍光色素であるpHrodo™ Redを結合させた貪食作用の評価試薬）を添加した。動画冒頭では、粒子は細胞外に位置しており、培地のpHが中性であるため蛍光を発しないが、貪食されると細胞内小器官の酸性環境にさらされ、鮮やかな赤色の蛍光を発する。動画では、24時間かけて細胞内に蓄積する赤色蛍光粒子が増加している様子が見られ、ioAstrocytesが貪食能を有することを確認できる。

ioGlutamatergic Neuronsの共培養

ioAstrocytesとioGlutamatergic Neuronsの共培養8日目（ioAstrocytesは17日目、ioGlutamatergic Neuronsは8日目）、共培養11日目（ioAstrocytes は21日目、ioGlutamatergic Neuronsは11日目）、共培養13日目（ioAstrocytesは24日目、ioGlutamatergic Neuronsは13日目）の様子。