ioAstrocytes ヒト iPS 細胞由来アストロサイト｜Bit Bio社

ioAstrocytesはヒトiPS細胞由来のアストロサイトです。細胞には、ドキシサイクリンで転写因子の発現を誘導可能な「opti-ox」カセットが組み込まれており、細胞融解後、ドキシサイクリンを添加し培養することでアストロサイトへ分化させます。

• 神経変性疾患モデリング
• 神経薬理学
• 神経炎症研究
• 貪食アッセイ
• サイトカイン応答アッセイ
• 共培養研究

• 共培養可能：ニューロンと共培養し、中枢神経系の機能解析に利用可能
• 機能的：貪食作用、サイトカイン分泌能あり
• ばらつきが少ない：ロット間のばらつきが少なく、創薬や毒性評価のモデルとして利用可能

細胞播種後、短期間で分化・成熟させることが可能

本製品はミクログリアの前駆細胞として凍結保存した状態で提供され、推奨培地で培養することにより急速に成熟します。bit.bioでの誘導後、お客様には3段階の生成プロトコールを行っていただきます。まずは推奨培地で2日間の安定化、次に6日間のプレメンテナンス、8日目以降は使用可能な状態でのメンテナンス期間です。

細胞の形態

細胞は培養8日目から星型の形態を獲得する。（10X、400μmのスケールバー）

表現型マーカーの発現

培養15日目および22日目の細胞に免疫蛍光染色を行い、MERGEを作成した。DAPIで細胞核を染色し、特異的な抗体を用いてSOX9、S100B、およびビメンチンを染色した。
S100B： 主にアストロサイトで見られるタンパク質。活性化、神経保護、カルシウム恒常性、およびアストロサイトとニューロン間の伝達に重要な役割を果たす。
SOX9：アストロサイトの分化に不可欠な転写因子。
ビメンチン：アストロサイトに豊富に含まれる細胞骨格分子。

サイトカイン分泌

培養15日目の細胞を３種類の炎症性サイトカインカクテル（T）とビークルコントロール（V）で処理し、24時間後に培地に含まれるサイトカイン濃度を測定した。炎症性サイトカイン処理をした細胞は、コントロール細胞と比較して優位にサイトカインの分泌を誘導した。
※炎症性サイトカインカクテルにIL-１βとTNFγが含まれているため、これらの物質で刺激した際には検出値が高くなることにご留意ください。

ロット間の一貫性

培養1日目および22日目の細胞に対して、3つの独立したロットでバルクRNAシーケンス分析を実行した。結果、各日数でロット間のクラスターが非常に近く、高い一貫性が示された。（発現遺伝子の差異は0.5%未満）

ioAstrocytesとioGlutamatergic Neuronsの共培養

（A）共培養時の免疫染色画像
神経細胞マーカーMAP2（緑）、星状膠細胞マーカーS100B（紫）、DAPIによる核染色（青）を示した。

（BおよびC）各時点でウェル内の神経活性が観察された領域の割合と平均発火率（Hz）
ioGlutamatergic NeuronsとioAstrocytesの単独培養および共培養における活動電位を測定した。
共培養はioGlutamatergic Neurons（培養０日目）にioAstrocytes（培養10日目）を播種して確立した。培養10日目のioAstrocytesと培養０日目のioGlutamatergic Neuronsは、それぞれの単独培養にも使用された。

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