β-HBを蛍光測定するキット β-ヒドロキシ酪酸（ケトン体）アッセイキット（蛍光法）

血漿、血清、尿、細胞培養上清中、組織抽出物のβ-ヒドロキシ酪酸量を蛍光測定するキットです。

本製品は、補酵素NAD⁺がNADHに還元される酵素回路反応に基づいています。NADHは蛍光プローブと反応し、蛍光物質が生成します。この蛍光を測定してβ-ヒドロキシ酪酸量を決定します。

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β-ヒドロキシ酪酸（β-HB）とは

ケトン体は、脂肪酸の酸化によって肝臓と腎臓で産生される水溶性の分子です。アセト酢酸、β-ヒドロキシ酪酸（β-HB）、それらの脱カルボキシル産物であるアセトンの３つが最初のケトン体です。β-HBはアセト酢酸のケトン基が還元されてアルコールに変換されたもので、β-HBとアセト酢酸はグルコースが枯渇した時にエネルギー源として使用されます。ケトン体は、絶食、飢餓、長期にわたる強度の運動、低炭水化物ダイエット、未治療のＩ型糖尿病のような生理的条件で産生されます。このような状況において、肝臓における糖新生は２つのアセチルCoA分子からアセト酢酸を産生します。β-HBとアセト酢酸は末梢組織に運ばれ、細胞のクエン酸回路を介して再びアセチルCoAにエネルギ―変換されます。アセトンはアセチルCoAに変換される前に肝臓で乳酸に変換され、ピルビン酸に変換されます。通常は尿として排出されるか、呼気として吐き出されます。

ケトン体が多いと、ケトン症、または1型糖尿病、ケトアシドーシスになる可能性があります。長引くケトン症は、生命を脅かす代謝性アシドーシスにつながります。病理学的にみると、ケトン症によって、臓器不全、子供の低血糖症、糖尿病、アルコール中毒、副腎皮質ホルモンや成長ホルモンの不足が起こります。ケトン症の程度は、血中のβ-HB濃度を観察して決定します。

ケトン体は、甘い香りを持ち、ケトン症患者やケトアシドートス患者の呼気や尿中から検出されます。β-HBは、血清中に最も普通に存在するケト酸で、測定されるケトン体のうち最大で75%を占めます。ケトン症に罹患している間は、β-HBが他のケトン体より増加し、ケトアシドーシスのより正確な指標となります。

• 血漿、血清、尿、細胞培養上清中、組織抽出物に使用可能
• 検出限界：2 µM
• 1キットで100アッセイが可能

• 40×蛍光プローブ
• NAD⁺補酵素
• β-ヒドロキシ酪酸酵素
• β-ヒドロキシ酪酸スタンダード
• 10×アッセイバッファー
• 500×電子伝達体

本製品は、生体試料中のβ-ヒドロキシ酪酸（β-HB）の量を測定します。本製品は、補酵素NAD⁺がNADHに還元される酵素回路反応に基づいています。NADHは蛍光プローブと反応し、蛍光物質が生成します。この蛍光を96ウェル蛍光プレートリーダーで測定します。蛍光強度は、サンプル中のβ-ヒドロキシ酪酸の量に比例します。サンプルとスタンダードは30分インキュベートし、λ _ex= 530〜570 nm / λ _em= 590〜600 nm を測定します（図1）。濃度が既知であるβ-ヒドロキシ酪酸スタンダードとサンプルの蛍光強度を比較します。

図1. β-ヒドロキシ酪酸(ケトン体）アッセイ原理（蛍光法）

図2. β-ヒドロキシ酪酸(ケトン体）標準曲線

図3. β-ヒドロキシ酪酸の検出
正常なヒト血漿および血清について、タンパク質を除去し、1× アッセイバッファで10倍に希釈し、100 µMのβ-ヒドロキシ酪酸を加えたサンプルと加えないサンプルを用意した。サンプルはアッセイプロトコールに従った。バックグラウンドは差し引いた。

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