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好熱菌Thermus Filiformis のDNA ligase Bioneer社 Tfi DNAリガーゼ

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メーカー名：Bioneer Corporation

Tfi DNAリガーゼは、2本鎖DNAまたはオリゴヌクレオチドの3'ヒドロキシル末端及び5'リン酸末端をリン酸エステル結合させます。反応温度は、T4 DNAリガーゼなどの他の酵素に比べて高く、45～65℃の範囲で活性を持ちます。高温でのライゲーション反応が必要な場合に使用できます。

Bioneer社　DNAポリメラーゼ酵素選択ガイド

構成内容

Tfi DNAリガーゼ
反応バッファー（10×）
希釈バッファー

アプリケーション

リガーゼ連鎖反応（LCR）、オリゴヌクレオチドライゲーションアッセイ（OLA）、PCR増幅時のリン酸化オリゴヌクレオチドの結合による変異誘発、複数部位への同時変異誘発

製品データ

図1　各種温度におけるライゲーションテスト
リガーゼ1ユニット及び1μgのDNAを含む反応液を各温度で10分間インキュベートした。
レーン1：λDNA/PspE I（コントロール）
レーン2：45℃、レーン3：50℃、レーン4：55℃、レーン5：60℃、レーン6：65℃

図2　95℃での熱安定性試験
リガーゼを95℃で各時間インキュベートした後、1μgのDNAを含む反応液に1ユニットを加え、45℃で10分間インキュベートした。
レーン1：λDNA/PspE I（コントロール）レーン2：10分間、レーン3：20分間、レーン4：30分間、レーン5：40分間、
レーン6：50分間、レーン7：60分間、レーン8：70分間、レーン9：80分間、レーン10：90分間
（95℃でのインキュベート時間）

図3　65℃での熱安定性試験
リガーゼを65℃で各時間インキュベートした後、1μgのDNAを含む反応液に1ユニットを加え、45℃で10分間インキュベートした。
レーン1：λDNA/PspE I（コントロール）
レーン2：6時間、レーン3：12時間、レーン4：18時間、レーン5：24時間、レーン6：30時間、
レーン7：36時間、レーン8：24時間、レーン9：48時間、レーン10：54時間、レーン11：60時間、
レーン12：66時間、レーン13：72時間、レーン14：78時間
（65℃でのインキュベート時間）