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S. pyogenes 由来とS. aureus由来それぞれに対応したキットをご用意 Cas9 (CRISPR Associated Protein 9) ELISAキット

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メーカー名：Cell Biolabs, Inc.

本製品は、細胞や組織ライセート中のS. pyogenesまたはS. aureus由来の Cas9 を定量的に測定するELISAキットです。

背景

Cas9 (CRISPR associated protein 9) はRNA 誘導型ヌクレアーゼです。この酵素は、S. pyogenes やS. aureus を含む様々な細菌の CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) 獲得免疫システムに関与します。 Cas9 はプラスミドDNA や侵入するバクテリオファージDNA のような外来性DNA を解き、ガイドRNA の 20 塩基対のスペーサー領域と相補的な部位をチェックします。DNA 基質がガイドRNAに相補的である場合、Cas9 は侵入した DNAを切断します。

Cas9 タンパク質は、DNA への部位特異的な２本鎖切断を導入するゲノム工学ツールとして注目を集めています。多くの実験モデル動物において、非相同末端結合や相同組み換えを介するDNA切断により、遺伝子の不活性化や異種遺伝子の挿入が可能です。また、関連するガイドRNA に相補的な類似配列を切断することも可能です。ヒト細胞におけるCRISPR/Cas9 システムの利用により、両遺伝子の欠損や遺伝子置換が実証されています。

特長

品名	SpCas9 ELISA Kit	SaCas9 ELISA Kit
品番	PRB-5079	PRB-5204
由来菌種	S. pyogenes	S. aureus
検出限界 (mg/mL)	1.5	3.9

構成内容

品名	Cas9 ELISA Kit (S. pyogenes) (SpCas9 ELISA Kit)	Cas9 ELISA Kit (S. aureus) (SaCas9 ELISA Kit)
品番	PRB-5079	PRB-5204
構成品	ストレプトアビジン-酵素コンジュゲート
	アッセイ希釈液
	10x 洗浄バッファー
	基質溶液
	反応停止液
	Cas9スタンダード（S. pyogenes由来）	SaCas9スタンダード（S. aureus由来）
	抗Cas9抗体コート済みプレート	96wellタンパク質結合プレート
	1000x ビオチン化抗Cas9抗体	100x 抗SaCas9コーティング抗体
	-	1000x ビオチン化抗SaCas9抗体
	-	5x SaCas9サンプル希釈バッファー

製品データ

スタンダードカーブ

図1. SpCas9 ELISA スタンダードカーブ
SpCas9 ELISA Kit(品番：PRB-5079) にて測定した。

図2. SaCas9 ELISA スタンダードカーブ
SaCas9 ELISA Kit(品番：PRB-5204) にて測定した。

Cas9 タンパク質検出

図3. トランスフェクション293細胞での Cas9 タンパク質検出
哺乳類発現ベクターを用いて Cas9 タンパク質を一過性発現させた細胞と、モックトランスフェクションの細胞を用意した。48時間後、RIPAバッファーにて各細胞を溶解し、タンパク質濃度を測定した。その後、① 細胞ライセートなし (Neg)、② 50 ng/mL Cas9 ヌクレアーゼ (Pos)、③ モックトランスフェクションの細胞ライセート 10 µg (Mock)、④ Cas9 一過性発現細胞ライセート 10 µL (Cas9) の4つのサンプル中の Cas9 濃度をSpCas9 ELISA Kit (品番：PRB-5079) にて測定した。

図4. トランスフェクション293細胞での SaCas9 タンパク質検出
哺乳類発現ベクターを用いて、空ベクター（コントロール）、Streptococcus pyogenes Cas9（SpCas9）または Staphylococcus aureus Cas9（SaCas9）を一過性発現させた細胞を用意した。48時間後、各細胞を溶解し、タンパク質濃度を測定した。その後、①コントロール細胞ライセート（control lysate）、② SpCas9 発現細胞ライセート（SpCas9 lysate）、③ SaCas9 発現細胞ライセート（SaCas9 lysate）のサンプル中の Cas9 濃度をSaCas9 ELISA Kit（品番：PRB-5204）にて測定した。

Cas9 (CRISPR Associated Protein 9) ELISAキット

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Cas9 (CRISPR Associated Protein 9) ELISA Kit	CBL	PRB-5079	96 ASSAY	￥162,000
Cas9 (CRISPR Associated Protein 9) ELISA Kit, Staphylococcus aureus	CBL	PRB-5204	96 ASSAY	￥145,000