記事ID ： 33244

Cas9 (CRISPR Associated Protein 9) ELISAキット

カテゴリから探す > 抗体アッセイ > ELISA／ELISpot アッセイ > ELISA・EIA キット

メーカー名：Cell Biolabs, Inc.

細胞や組織ライセート中のS. pyogenes 由来の Cas9 を定量的に測定するELISAキットです。

背景

Cas9 (CRISPR associated protein 9) はRNA 誘導型ヌクレアーゼです。この酵素は、Streptococcus pyogenes を含む様々な細菌の CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) 獲得免疫システムに関与します。 Cas9 はプラスミドDNA や侵入するバクテリオファージDNA のような外来性DNA を解き、ガイドRNA の 20 塩基対のスペーサー領域と相補的な部位をチェックします。DNA 基質がガイドRNAに相補的である場合、Cas9 は侵入した DNAを切断します。

Cas9 タンパク質は、DNA への部位特異的な２本鎖切断を導入するゲノム工学ツールとして注目を集めています。多くの実験モデル動物において、非相同末端結合や相同組み換えを介するDNA切断により、遺伝子の不活性化や異種遺伝子の挿入が可能です。また、関連するガイドRNA に相補的な類似配列を切断することも可能です。ヒト細胞におけるCRISPR/Cas9 システムの利用により、両遺伝子の欠損や遺伝子置換が実証されています。

特長

検出限界：1.5 ng/mL
細胞や組織ライセート中のS. pyogenes由来の Cas9 を検出

構成内容

抗 Cas9 抗体コート済プレート
ビオチン標識抗 Cas9 抗体
ストレプトアビジン-酵素コンジュゲート
アッセイ希釈液
洗浄液
基質溶液
停止液
Cas9 タンパク質スタンダード

製品データ

図1. Cas9 ELISA スタンダードカーブ

図2. トランスフェクション293細胞での Cas9 タンパク質検出
哺乳類発現ベクターを用いて Cas9 タンパク質を一過性発現させた細胞と、モックトランスフェクションの細胞を用意した。48時間後、RIPAバッファーにて各細胞を溶解し、タンパク質濃度を測定した。その後、① 細胞ライセートなし (Neg)、② 50 ng/mL Cas9 ヌクレアーゼ (Pos)、③ モックトランスフェクションの細胞ライセート 10 µg (Mock)、④ Cas9 一過性発現細胞ライセート 10 µL (Cas9) の4つのサンプル中の Cas9 濃度を本キット (品番：PRB-5079) にて測定した。